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亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis Guenée幼虫对外源物的免疫应激反应研究

作　者: 董秋安
导　师: 冯从经
学　校: 扬州大学
专　业: 农业昆虫与害虫防治
关键词: 亚洲玉米螟大肠杆菌 Sephadex G50 抗菌肽酚氧化酶抗氧化酶血细胞活性氧自由基
分类号: S433
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

外源物侵染可引起亚洲玉米螟幼虫产生的免疫应激反应。本研究通过生物侵染(大肠杆菌)和非生物注射(Sephadex G50)实验,对外源物侵染后幼虫体内的细胞免疫及体液免疫反应的应激生理机制进行了研究,主要结果如下:1、采用3.0×106细胞/mL大肠杆菌注射后可诱导亚洲玉米螟幼虫体内产生抗菌肽,通过SDS-PAGE分析明确此种抗菌肽的相对分子量约为7.2 kD,该抗菌肽的诱导量在一定时间内与诱导时间成正比。此抗菌肽可对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌都有一定的抑制作用,且在100℃高温处理5 min后依然具有明显的抗菌活性,其在pH值为8.0时抑菌活性最强,抑菌圈直径达6.8±0.8 mm。2、不同浓度大肠杆菌细胞注射亚洲玉米螟幼虫后可引起血细胞总数及浆细胞、粒细胞数量的明显上升(P<0.01),引起亚洲玉米螟幼虫体内PO活性升高,并同时应激产生大量活性氧自由基(ROS),诱导幼虫所有组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-pX)、谷胱甘肽转硫酶(GST)及谷胱甘肽还原酶(GR)的活性上升(P<0.01),但是3×105、3×106/ml浓度大肠杆菌细胞注射后,血细胞总数,粒细胞、浆细胞数量,各种酶的活性及ROS含量在12 h左右会有剧烈的下降趋势。在不同组织中GSH-pX、GST、GR分布存在差异,其中GSH-pX活性在血清中最高,脂肪体次之,中肠组织再次、体壁组织中最低;GR活性在中肠组织中最高,血清中最低;GST活性在血清中最高、体壁组织中最低。而PO活性在血清最高,体壁组织次之,血细胞溶离物中最低。3、注射Sephadex G50珠后亚洲玉米螟幼虫血细胞形态没有明显变化,但可引起血细胞总数明显上升(P<0.05),粒细胞、浆细胞数量也明显上升(P<0.05),且血细胞对Sephadex G50珠的包囊作用过程中,包囊率>有细胞粘附率>无细胞粘附率,并可明显诱导PO活性上升(P<0.01)。

全文目录

中文摘要  9-11
ABSTRACT  11-13
文献综述  13-33
  1 昆虫体液免疫  14-19
    1.1 抗菌肽  14-17
    1.2 溶菌酶  17
    1.3 酚氧化酶  17-19
  2 昆虫的细胞免疫  19-24
    2.1 昆虫血细胞的分类  19-20
    2.2 昆虫血细胞的防卫机制  20-22
    2.3 昆虫血细胞免疫的识别机制  22-24
  3. 昆虫的免疫应激  24-28
    3.1 免疫应激与活性氧自由基  24-26
    3.2 抗氧化酶种类、功能及作用机理  26-28
  4. 研究目的和意义  28-30
  参考文献  30-33
第一章亚洲玉米螟幼虫体内抗菌肽诱导及其性质分析  33-48
  1. 材料与方法  34-36
    1.1 供试昆虫及大肠杆菌诱导物的制备  34
    1.2 试验方法  34-36
      1.2.1 亚洲玉米螟幼虫抗菌肽的诱导及血淋巴提取  34-35
      1.2.2 诱导后亚洲玉米螟幼虫血淋巴的抗菌谱分析及抑菌作用测定  35
      1.2.3 温度对抗菌肽抑菌活性的影响  35
      1.2.4 pH 值对抗菌肽抑菌活性的影响  35-36
      1.2.5 亚洲玉米螟幼虫血淋巴中抗菌肽的SDS-PAGE 分析  36
      1.2.6 数据分析  36
  2. 结果与分析  36-41
    2.1 抗菌肽抗菌谱及抑菌作用分析  36-37
    2.2 抗菌肽诱导情况  37-39
    2.3 温度对抗菌肽抑菌活性的影响  39-40
    2.4 pH 值对抗菌肽抑菌活性的影响  40-41
    2.5 亚洲玉米螟幼虫血淋巴中抗菌肽的鉴定  41
  3. 讨论  41-46
  参考文献  46-48
第二章亚洲玉米螟幼虫注射大肠杆菌后免疫应激反应研究  48-82
  1. 材料与方法  49-55
    1.1 供试昆虫与菌种  49
    1.2 不同浓度大肠杆菌注射  49
    1.3 血细胞的光镜检测  49-50
    1.4 血清及血细胞溶离物制备  50
    1.5 脂肪体、中肠及体壁组织制备  50-51
    1.6 酚氧化酶活性测定  51
    1.7 谷胱甘肽过氧化物酶活性DTNB 测定法  51-52
    1.8 谷胱甘肽还原酶活性测定  52-53
    1.9 谷胱甘肽硫转移酶活性测定  53
    1.10 蛋白浓度测定  53
    1.11 活性氧自由基测定  53-55
      1.11.1 H202 产生速率变化测定  53-54
      1.11.2 活性氧水平的测定  54-55
    1.12 数据分析  55
  2. 结果与分析  55-75
    2.1 注射不同细胞浓度大肠杆菌对亚洲玉米螟幼虫血细胞总数和各类血细胞数量的影响  55-58
    2.2 注射不同细胞浓度大肠杆菌后对亚洲玉米螟幼虫体内酚氧化酶（PO）活性的影响  58-61
    2.3 注射大肠杆菌对亚洲玉米螟幼虫体内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-pX)活性的影响  61-64
    2.4 注射不同细胞浓度大肠杆菌对亚洲玉米螟幼虫体内谷胱甘肽还原酶活性的影响  64-67
    2.5 注射大肠杆菌对亚洲玉米螟幼虫体内谷胱甘肽转硫酶（GST）活性的影响  67-70
    2.6 注射大肠杆菌对亚洲玉米螟幼虫体内H202 产生速率的影响  70-73
    2.7 注射大肠杆菌对亚洲玉米螟幼虫体内活性氧水平的影响  73-75
  3. 讨论  75-80
    3.1 注射不同浓度大肠杆菌液后亚洲玉米螟幼虫细胞免疫的影响  75-76
    3.2 大肠杆菌注射后PO 与ROS 含量间的相互关系  76-78
    3.3 大肠杆菌注射后ROS 含量、H202 产生速率与抗氧化酶之间的相互关系  78-80
  参考文献  80-82
第三章注射SEPHADEX G50 珠亚洲玉米螟幼虫的免疫应激反应研究  82-95
  1. 材料与方法  82-85
    1.1 供试昆虫  82-83
    1.2 Sephadex G50 珠注射  83
    1.3 包囊作用实验  83
    1.4 酚氧化酶活性测定  83-84
    1.5 蛋白浓度测定  84
    1.6 血细胞的光镜检测  84
    1.7 数据处理  84-85
  2. 结果与分析  85-90
    2.1 亚洲玉米螟血淋巴中血细胞类型和形态特征  85-86
    2.2 Sephadex G50 珠注射对亚洲玉米螟幼虫血细胞数量的影响  86-87
    2.3 注射Sephadex G50 珠后昆虫血细胞不同时间的包囊行为  87-89
    2.4 注射Sephadex G50 珠对亚洲玉米螟幼虫血清内酚氧化酶活性的影响  89-90
  3. 讨论  90-95
参考文献  95-97
致谢  97-98
攻读硕士学位期间发表的学术论文  98

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