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补肾益气方诱导人蜕膜CD4~+T细胞SOCS3基因表达和Th2型免疫优势

作　者: 张玲
导　师: 王文君
学　校: 复旦大学
专　业: 妇产科学
关键词: 蜕膜 不明原因流产 免疫组化 SOCS3 补肾益气方 蜕膜CD4~+T细胞 免疫磁珠 IL-4 IL-10 IFN-γ TNF-α realtime-PCR western blot
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


第一部分免疫组化鉴定SOCS3在正常和流产蜕膜组织上的表达目的:初步了解人正常和流产蜕膜组织中SOCS3的表达情况,为探讨补肾益气方如何对蜕膜进行免疫调节做基础。方法:收集孕6—10周行人工流产术的正常孕妇和不明原因流产孕妇的蜕膜组织,用免疫组化方法检测正常和流产的蜕膜组织是否表达SOCS3。结果:在正常孕妇和流产者的蜕膜组织上,无论是腺体还是间质都可见到SOCS3的表达。结论:正常和流产蜕膜组织上都有SOCS3的表达,这就为进一步探讨补肾益气方如何调控蜕膜的免疫平衡提供了可能的机制。第二部分补肾益气方对人蜕膜CD4~+T细胞分泌Th1、Th2型细胞因子的影响目的:观察补肾益气方对人早孕蜕膜CD4~+T细胞分泌IL-4、IL-10和IFN-γ、TNF-α的调节作用,探讨其调节母胎界面Th1/Th2免疫保胎机制。方法:将40只成年雌性SD大鼠随机分成两组:补肾益气方组和生理盐水组,分别灌服体积相同的中药和生理盐水,早晚各一次,3天后颈动脉取血;收集孕6-10周行人工流产术的正常孕妇的蜕膜组织,用免疫磁珠方法分离出CD4~+T细胞进行培养,分4组:10%胎牛血清为正常对照组(A组),10%中药血清组(B组),20%中药血清组(C组),10%动物灌服生理盐水血清组(D组),分别培养24h、48h、72h,以ELISA检测法检测细胞培养上清中IL-4、IL-10和IFN-γ、TNF-α的水平。结果:B组和C组与A组相比,Th2型细胞因子IL-4、IL-10的水平均显著升高(P＜0.05),Th1型细胞因子IFN-γ的水平显著降低(P＜0.01)。但是B组和C组的结果之间无显著差异;只有B组24h时间段的TNF-α与A组相比有意义(P＜0.05)。结论:补肾益气方通过促进蜕膜CD4~+T分泌IL-4、IL-10,并抑制其产生IFN-γ、TNF-α,从而促进母胎界面形成Th2优势。第三部分补肾益气方对人蜕膜CD4~+T细胞的SOCS3基因的影响目的:观察补肾益气方是否通过SOCS3基因来调控Th细胞的分化影响,探讨补肾益气方调控Th细胞分化的作用机制。方法:将40只成年雌性SD大鼠随机分成两组:补肾益气方组和生理盐水组,分别灌服体积相同的中药和生理盐水,早晚各一次,3天后颈动脉取血;收集孕6—10周行人工流产术的正常孕妇的蜕膜组织,用免疫磁珠方法分离出CD4~+T细胞进行培养,分4组:10%胎牛血清为正常对照组(A组),10%中药血清组(B组),20%中药血清组(C组),10%动物灌服生理盐水血清组(D组),培养24小时后收集细胞,real-time PCR检测各组SOCS3基因的转录状况,western blot检测24h时各组SOCS3蛋白的表达状况。结果:①realtime FCR:与A组相比,B组和D组没有差异性,而C组SOCS3 mRNA的量明显上升(P＜0.01);②western blotting:比较各组与内参的比值来评价各组蛋白表达水平,与A组相比,B和C组的比值都有统计学意义(P＜0.05),其中C组的变化更为显著(P＜0.01)。结论:C组SOCS3 mRNA水平升高,补肾益气方组SOCS3蛋白表达明显增加,表明补肾益气方有可能通过SOCS3来调控Th细胞的分化。

全文目录


中文摘要  4-5
英文摘要  5-8
前言  8-11
正文  11-33
  第一部分 免疫组化鉴定SOCS3在正常和流产蜕膜组织上的表达  11-15
    1 实验材料和方法  11
    2 实验结果  11-12
    讨论  12-15
  第二部分 补肾益气方对人蜕膜CD4~+T细胞分泌Th1细胞因子(TNF-α、IFN-γ)和Th2(IL-4、IL-10)细胞因子的调控作用  15-24
    1 材料和方法  15-17
    2 结果  17-20
    讨论  20-24
  第三部分 补肾益气方对人蜕膜CD4~+T细胞的SOCS3表达的影响  24-33
    1 材料和方法  24-30
    讨论  30-33
参考文献  33-39
致谢  39-40
综述  40-59
  1.IL-10在妊娠中的研究进展  40-48
  2.中药在延缓皮肤老化方面的作用的研究进展  48-59
发表文章  59-68
  补肾益气方对人蜕膜CD4~+T细胞分泌IL-4和IFN-γ的调控作用  59-68

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