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脐带血造血干细胞逃逸NK细胞杀伤机制的实验研究

作　者: 王鸣
导　师: 朱同玉；张雁云；许明；戎瑞明
学　校: 复旦大学
专　业: 泌尿外科
关键词: 脐带血造血干细胞免疫逃逸自然杀伤细胞 HLA-G
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 51次
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内容摘要

目的:近年来有研究发现异基因脐带血造血干细胞(UCB-HSCs)能够在免疫功能正常的受者体内长期存活。但是UCB-HSCs免疫逃逸能力的机制尚未阐明。而自然杀伤细胞(NK细胞)在杀伤异基因造血干细胞中发挥了主要作用,因此,我们研究UCB-HSCs逃避NK细胞的杀伤的能力,并且探索这种免疫逃逸能力与其细胞表面表达NK细胞活化性和抑制性两类受体的关系,以期找到UCB-HSCs免疫逃逸能力的机制。方法:(1)利用免疫磁珠法分别从成人脐带血、外周血及骨髓中分离UCB-HSCs、外周血造血干细胞(PB-HSCs)及骨髓造血干细胞(BM-HSCs);利用免疫磁珠法及流式细胞分选法从成人外周血中分离NK细胞;(2)以NK细胞和NK-92细胞为效应细胞,并分别以UCB-HSCs为靶细胞,以PB-HSCs、BM-HSCs以及去除了造血干细胞的外周血单个核细胞(PB-MNCs)为对照靶细胞,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法分析效应细胞对靶细胞的杀伤率;以NK细胞为效应细胞,并分别以UCB-HSCs、PB-HSCs、BM-HSCs为靶细胞,通过克隆增殖实验分析效应细胞对靶细胞增殖能力的抑制率;(3)利用流式细胞技术分析UCB-HSCs、PB-HSCs、BM-HSCs、PB-MNCs表面NK细胞活化性受体NKp30、NKp44、NKp46的配体以及NK细胞抑制性受体的配体HLA-G分子的表达情况;(4)利用融合蛋白及抗体阻断NKp30、NKp44、NKp46以及HLA-G,观察NK细胞对UCB-HSCs、PB-HSCs、BM-HSCs、PB-MNCs杀伤作用的变化。结果:(1)UCB-HSCs具有逃避NK细胞杀伤的能力,与对照组细胞相比差别有统计学意义;(2)UCB-HSCs、PB-HSCs、BM-HSCs表面低表达NK细胞活化性受体NKp30、NKp44、NKp46的配体,与PB-MNCs相比,差别有统计学意义;(3)UCB-HSCs表面高表达HLA-G分子,与PB-HSCs、BM-HSCs、PB-MNCs相比,差别有统计学意义。结论:(1)UCB-HSCs具有逃避NK细胞杀伤的能力;(2)UCB-HSCs表面低表达NK细胞活化性受体NKp30、NKp44、NKp46的配体可能是其逃逸NK细胞杀伤的机制之一;(3))UCB-HSCs表面高表达HLA-G分子是其逃逸NK细胞杀伤的主要机制。

全文目录

摘要  4-8
  中文摘要  4-6
  英文摘要  6-8
前言  8-10
正文  10-37
  材料与方法  10-16
  结果  16-29
  小结  29-30
  讨论  30-32
  结论  32-33
  参考文献  33-37
附录一综述  37-44
附录二发表文章  44-45
致谢  45-46

脐带血造血干细胞逃逸NK细胞杀伤机制的实验研究

内容摘要

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