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基于四环素调控系统的TRE-C-imp13转基因小鼠的构建及表达分析

作　者: 蔡兰兰
导　师: 陶涛
学　校: 厦门大学
专　业: 细胞生物学
关键词: importin 13(imp13) Tet-on系统转基因小鼠
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

由于真核细胞的基因复制、转录与蛋白质的表达翻译在细胞内分区进行,蛋白质及核酸等生物大分子跨核膜转运成为细胞中最重要的生物学功能之一。importin-β家族蛋白介导的底物核质转运是其中主要的机制。importin 13(imp13)是这个家族成员之一,也是目前所知的哺乳动物细胞中唯一能双向转运底物蛋白的蛋白质。目前研究已发现importin 13的底物有UBC9,Rbm8,Pax6,NF-YB/NF-YC,GR,myopodin,negative cofactor 2,CHRAC-15/17,p12/CHRAC-17和eIF-1A。这些底物大都与发育有关,因此,importin 13可能在机体发育中有重要的生物学功能。2004年,Tao等发现importin 13在缺失了N端之后滞留在细胞质;2006年和2008年Tao等发现C-imp13负调控importin 13的转运功能;2006年,Yasuka等在小鼠睾丸中发现了importin 13的另外一个转录本(TS-imp13),它包含了importin 13的第六个内含子的75 bp及之后的C端的14个外显子。他们推测TS-imp13可能对importin 13转运功能起到负调控作用。最近,Giagtzoglou等发现,importin 13可调节果蝇神经肌肉连接中神经递质的释放,缺失importin 13导致果蝇的视觉能力下降并在幼虫阶段死亡,说明importin 13对神经的功能和机体的发育有重要的功能。为了研究importin 13在发育过程,特别是神经发育过程中的作用,本研究构建了N端缺失的C-imp13(a.a.450-963)转基因小鼠TRE-C-imp13,并根据Tet-on系统原理,实时调控其表达。在100只出生动物中,Genotyping检测到27只含有TRE-C-imp13转基因后代(27 founders);RT-PCR和real-time PCR方法筛选出四个表达有C-imp13的founder,为今后研究importin 13在发育过程中的作用提供了一个重要的动物模型。

全文目录

中文摘要  6-7
英文摘要  7-8
1.前言  8-23
  1.1 Importin β家族介导的蛋白质核质转运简介  8-11
  1.2 Importin 13在发育过程中的功能  11-19
  1.3 Tet-on系统简介  19-21
  1.4 本课题研究的目的和意义  21-23
2.材料与方法  23-35
  2.1 实验材料  23-24
  2.2 实验方法  24-35
3.结果与分析  35-47
  3.1 本论文主要实验流程  35
  3.2 转基因载体的构建  35-39
  3.3 转基因小鼠的获得  39-42
  3.4 转基因小鼠的表达分析  42-47
4.讨论  47-48
参考文献  48-54
致谢  54-55
附录  55

基于四环素调控系统的TRE-C-imp13转基因小鼠的构建及表达分析

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