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载Survivin siRNA的壳聚糖及水溶性壳聚糖纳米粒的制备、鉴定及生物活性研究

作　者: 董瑾
导　师: 季金苟
学　校: 重庆大学
专　业: 分析化学
关键词: 水溶性壳聚糖 复凝聚法 纳米粒 siRNA Survivin
分类号: O636.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


Survivin是目前发现的一种只高表达于人癌症细胞而不表达于周围正常组织的凋亡抑制蛋白,siRNA通过RNA干扰使Survivin基因沉默就能使癌细胞恢复凋亡,从而达到治疗癌症的目的。壳聚糖纳米粒作为非病毒基因递送载体可以防止siRNA被降解,并且生物相容性良好、低毒、低免疫原性。但是壳聚糖水溶性较差的问题也引起了人们的广泛思考。为了探索水溶性壳聚糖作为Survivin siRNA载体的可行性以及抑制基因表达的效果,本文对制备水溶性壳聚糖的条件进行了优化,将优化的改性壳聚糖进行红外光谱和X射线衍射分析;并对壳聚糖纳米粒和水溶性壳聚糖纳米粒用复凝聚法进行制备,琼脂糖凝胶电泳分析纳米粒与DNA结合能力,比色法检测其包封率,透射电镜检测纳米粒的形态和粒径;用脂质体作为阳性对照,纳米粒体外转染Hep-2喉癌细胞观察其抑制癌细胞Survivin基因表达的效果。结果表明,乙酸1.0 ml,乙酸酐1.0ml,乙醇25ml,吐温80 1.0ml,吡啶6ml,搅拌1h时,单因素法控制脱乙酰度(D.D.)得到的改性壳聚糖水溶性最好(D.D.=50.73%),红外光谱分析发现顺利引入了乙酰基,降低了壳聚糖的脱乙酰度,X射线衍射发现壳聚糖的晶型受到破坏,结构规整性和结晶性都有所下降,从而具有水溶性。由琼脂糖凝胶电泳结果可知,siRNA与壳聚糖及水溶性壳聚糖均有效结合。壳聚糖纳米粒包封率为92.8%,水溶性壳聚糖纳米粒包封率为88%~92%。由透射电镜可知CS-TPP/siRNA纳米粒粒径50~100nm,改性CS-TPP/siRNA纳米粒粒径100nm左右,圆形颗粒。这就为进一步进行体外和体内转染奠定了基础。

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中图分类: > 数理科学和化学 > 化学 > 高分子化学（高聚物） > 天然高分子化合物（高聚物） > 高分子多聚糖
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