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食品中罂粟壳成分检测方法研究

作　者: 冯丽娟
导　师: 赵文
学　校: 河北农业大学
专　业: 农产品加工及贮藏工程
关键词: 罂粟壳生物碱高效液相色谱超声-微波协同萃取基因检测 DNA提取 PCR
分类号: R155.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

在众多的食品安全问题中,滥用非食品加工用添加物的不法行为给食品安全带来严重隐患。罂粟壳主要含有吗啡、可待因、罂粟碱等生物碱成分。由于罂粟壳对机体的作用类似吗啡,长期食用所造成的危害与吸食海洛因相似,因此国家将其列入麻醉药品予以管制,禁止非法供应、运输和使用。一些不法分子为了经济利益将其加入食品中,严重危害人们的健康。因此,建立一种分析掺入食品中的罂粟壳生物碱的简便、准确、高灵敏度的检测方法是迫切而有重要实践意义的。本文建立了高效液相色谱和分子生物学检测两种方法检测掺入食品中的罂粟壳生物碱。方法一,高效液相色谱检测法。样品经超声-微波协同萃取后,用有机溶剂纯化,采用Agilent XDB-C18(4.6×150 mm)色谱柱,磷酸缓冲盐-乙腈为流动相梯度分离,流速为1 mL/min,紫外检测波长分别为吗啡210 nm,可待因213 nm,罂粟碱253 nm,外标法定量分析。结果表明,三种生物碱的标准曲线线性相关系数范围均达到0.9999;方法检出限(LOD)分别为0.5μg/mL、0.2μg/mL、0.4μg/mL;平均回收率分别为87.87%、90.80%、89.47%;精密度相对标准偏差(RSD)分别为:1.276%、1.523%、1.926%;重现性相对标准偏差(RSD)分别为:1.268%、1.687%、1.738%。方法二,分子生物学检测法。样品用改良的CTAB法提取DNA,将PVP-40与VC共用防止氧化。PCR反应体系最终确定为:总反应体系为25μL。其中包括1μL(5 U/μL)Taq E,2.5μL 10×PCR buffer(Mg2+),3.5μL dNTPs混合物,正向和反向引物各为1.5μL,模版5μL,ddH2O 10μL。PCR反应体系扩增条件:94℃预变性5 min,在按94℃3 0 s→60℃30 s→72℃60 s进行35个循环,最后72℃延伸6 min。PCR反应产物在2%的琼脂糖凝胶中进行电泳,凝胶成像系统观察结果。本试验建立的两种方法均可测定掺入食品中的罂粟壳。方法一具有回收率高、灵敏度高、精密度高等优点,可适用于食品中罂粟壳生物碱的检测;方法二仅对分子生物学检测这个方法进行初探,其中还有需要改进的地方,具有广阔的应用前景。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-9
1 引言  9-20
  1.1 罂粟壳  9-10
  1.2 生物碱  10-11
  1.3 罂粟壳生物碱  11-13
    1.3.1 吗啡  11
    1.3.2 可待因  11-12
    1.3.3 罂粟碱  12-13
  1.4 罂粟壳生物碱提取方法  13-15
    1.4.1 煎煮法  13
    1.4.2 浸渍法  13
    1.4.3 回流法  13-14
    1.4.4 渗漉法  14
    1.4.5 超声辅助提取法  14
    1.4.6 微波萃取法  14-15
    1.4.7 超临界流体萃取法  15
  1.5 罂粟壳生物碱检测方法  15-19
    1.5.1 化学分析法  15-16
    1.5.2 色谱法  16-17
    1.5.3 极谱法  17
    1.5.4 免疫分析法  17-18
    1.5.5 其他方法  18-19
  1.6 研究目的和意义  19
  1.7 研究内容  19-20
2 高效液相色谱法测定掺入食品中的罂粟壳生物碱  20-34
  2.1 仪器与试剂  20
    2.1.1 仪器  20
    2.1.2 试剂  20
  2.2 试验方法  20-23
    2.2.1 高效液相色谱条件  20-22
    2.2.2 标准曲线的绘制  22
    2.2.3 样品的提取  22-23
  2.3 结果与讨论  23-33
    2.3.1 高效液相色谱检测波长的选择  23-24
    2.3.2 流动相的选择  24
    2.3.3 洗脱类型的选择  24-25
    2.3.4 吗啡、可待因、罂粟碱及样品中这三种罂粟壳生物碱的高效液相色谱图  25-27
    2.3.5 方法的线性关系、检出限  27-28
    2.3.6 方法精密度  28
    2.3.7 方法的准确度  28
    2.3.8 回收率  28-29
    2.3.9 提取方法的确定  29-33
  2.4 结论  33-34
3 分子生物学方法检测掺入食品中的罂粟壳的方法初探  34-49
  3.1 仪器与试剂  34-36
    3.1.1 仪器  34
    3.1.2 试剂  34
    3.1.3 本试验主要溶液配制  34-36
  3.2 试验方法  36-39
    3.2.1 DNA 的提取  36-37
    3.2.2 VC 的使用及用量  37
    3.2.3 模板DNA 的质量检测  37
    3.2.4 PCR 检测条件的优化  37-38
    3.2.5 方法的特异性  38-39
    3.2.6 灵敏度的检测  39
  3.3 结果与讨论  39-47
    3.3.1 VC 的用量  39-40
    3.3.2 基因组的提取  40-41
    3.3.3 PCR 反应条件的优化  41-46
    3.3.4 方法的特异性  46-47
    3.3.5 灵敏度的检测  47
  3.4 结论  47-49
4 参考文献  49-55
5 在读期间发表的学术论文  55-56
6 作者简历  56-57
7 致谢  57

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