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北京油鸡cDNA文库构建及IL-18基因的克隆与表达研究

作　者: 佟春玲
导　师: 巴音吉日嘎拉；关伟军
学　校: 内蒙古农业大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 北京油鸡 cDNA文库 IL-18 基因克隆 表达
分类号: S831
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


构建北京油鸡cDNA文库对于北京油鸡遗传资源的保护以及其基因功能的研究具有重要意义。本实验取北京油鸡肝脏组织,提取总RNA,运用SMARTTM技术构建了北京油鸡肝脏组织cDNA文库,所构建的cDNA文库未扩增文库滴度为2.01×106pfu/mL,扩增文库滴度为1.17×1010 pfu/mL,重组率为93.8%,平均插入片段大小约为1.0 kb。本研究的实施不仅对于鸡基因结构与功能研究具有重要意义,而且对于北京油鸡基因资源的保存具有重要意义。本实验通过组织块贴壁培养法,成功构建了多浪羊的成纤维细胞系,并对其进行了多项生物学特性检测。检测结果表明,细胞系的各项指标均达到美国典型培养物中心ATCC (American type Culture Collection)细胞系鉴定标准,为研究外源基因在成纤维细胞中的表达与调控提供了优质的靶细胞。本实验采用BamH I与Xho I双酶切法建立北京油鸡pGEX-4T-1-IL-18原核表达载体,并在BL21菌中成功表达。采用Sal I与BamH I双酶切法建立北京油鸡pEGFP-N3-IL-18真核表达载体,并在浪羊成纤维细胞中成功表达。

全文目录


摘要  3-4
Abstract  4-10
1 引言  10-15
  1.1 CDNA 文库概述  10-12
    1.1.1 CDNA 文库的优点  10
    1.1.2 CDNA 文库构建基本原理  10-11
    1.1.3 CDNA 文库构建方法  11
    1.1.4 CDNA 文库的应用  11-12
  1.2 IL-18 基因研究概述  12-14
    1.2.1 白细胞介素的研究概况  12
    1.2.2 IL-18 的来源  12
    1.2.3 IL-18 的生物学作用  12-13
    1.2.4 IL-18 的作用  13
    1.2.5 鸡IL-18 基因研究概况  13-14
    1.2.6 IL-18 的应用前景  14
  1.3 原核表达载体的选择  14
  1.4 本实验的目的与意义  14-15
2 实验一 北京油鸡CDNA 文库的构建及检测  15-19
  2.1 实验材料  15
    2.1.1 实验动物  15
    2.1.2 实验仪器与设备  15
    2.1.3 实验试剂  15
  2.2 实验方法  15-16
    2.2.1 总RNA 的提取  15-16
    2.2.2 北京油鸡CDNA 文库构建及检测  16
  2.3 实验结果  16-18
    2.3.1 北京油鸡肝脏组织总RNA 的提取  16-17
    2.3.2 北京油鸡肝脏组织CDNA 文库的构建  17-18
    2.3.3 CDNA 文库的检测  18
  2.4 讨论  18-19
3 实验二 北京油鸡IL-18 基因的克隆及原核与真核表达载体的构建  19-34
  3.1 实验材料  19
    3.1.1 实验材料  19
    3.1.2 实验仪器与设备  19
    3.1.3 实验试剂与药品  19
  3.2 实验方法  19-24
    3.2.1 IL-18 基因的克隆  19-22
    3.2.2 IL-18 基因的原核和真核表达载体的构建  22-24
  3.3 实验结果  24-33
    3.3.1 IL-18 基因的克隆  24-27
    3.3.2 IL-18 基因原核与真核表达载体的构建  27-33
  3.4 讨论  33-34
    3.4.1 IL-18 基因的克隆  33
    3.4.2 IL-18 基因原核表达载体的构建  33-34
    3.4.3 IL-18 基因真核表达载体的构建  34
4 实验三 多浪羊成纤维细胞系的构建及IL-18 基因原核与真核表达研究  34-45
  4.1 实验材料  34
    4.1.1 实验材料  34
    4.1.2 实验仪器与设备  34
    4.1.3 实验试剂  34
  4.2 实验方法  34-37
    4.2.1 IL-18 基因在表达宿主菌BL21 中的表达及鉴定  34-36
    4.2.2 多浪羊成纤维细胞系的构建及检测  36-37
    4.2.3 IL-18 基因真核表达  37
  4.3 实验结果  37-44
    4.3.1 IL-18 基因原核表达与WESTERN-BLOT 鉴定  37-39
    4.3.2 多浪羊成纤维细胞系的构建及检测  39-43
    4.3.3 IL-18 基因真核表达  43-44
  4.4 讨论  44-45
5 全文讨论与结论  45-47
致谢  47-48
参考文献  48-51
作者简历  51

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 家禽 > 鸡
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