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马齿苋多糖的分离纯化及活性研究

作　者: 朱晓宦
导　师: 吴向阳
学　校: 江苏大学
专　业: 农产品加工及贮藏
关键词: 马齿苋多糖提取工艺分离纯化免疫活性体外抑瘤活性: MTT法抗氧化活性
分类号: TQ461
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

马齿苋（Portulaca oleracea L．）是我国古老的药食兼用植物。近年来，马齿苋以其丰富的营养、独特的药理作用以及药食兼用的特性，日益受到广泛的关注。研究表明，马齿苋具有调血脂、抗动脉硬化、抗肿瘤、抗衰老、降血糖等多种药理活性。多糖作为一种重要的生命物质，具有多种生物活性，特别是抗肿瘤、免疫调节作用受到广泛关注。本论文以马齿苋为原料，研究马齿苋多糖的提取、分离纯化及其体内免疫活性、体外抑瘤作用和抗氧化活性，为功能食品和药品的研究开发提供基础，为马齿苋的开发利用提供新途径。本论文的主要研究内容和结果如下：1、研究了马齿苋粗多糖的水提法优化工艺。采用苯酚-硫酸法测定多糖含量，以多糖提取率为考察指标，进行单因素实验，考察固液比、温度、时间、提取次数等因素对提取率的影响。在此基础上，进行正交试验，优化水提法工艺条件。水提法优化工艺条件为温度100℃、时间2h、固液比1：15、提取次数4次，此条件下多糖提取率达94.26％，粗多糖得率为15.50％，多糖含量为22.60％。2、研究了马齿苋多糖的分离纯化工艺，测定了多糖组分的分子量，分析了其单糖组成。（1）比较分析了大孔树脂吸附法、H₂O₂法以及活性炭吸附法三种脱色方法对马齿苋水提液的脱色效果，结果表明大孔吸附树脂AB-8的效果较好。（2）对脱色后的马齿苋多糖溶液进行脱蛋白试验研究，比较了三氯乙酸法、sevag法、三氯乙酸-正丁醇法三种方法脱蛋白的效果，结果表明三氯乙酸法效果最好。（3）采用DEAE-52纤维素，对脱色脱蛋白后的马齿苋多糖进行纯化，得到POPS₀、POPS₁、POPS₂、POPS₃和POPS₄五个多糖组分，纯度分别为84.31％、92.14％、90.45％、88.47％和82.16％，高效液相色谱法（HPLC）测得其分子量分别为1.801×10⁴D、5.583×10⁴D、2.721×10⁵D、6.006×10⁵D和9.443×10⁵D。用气相色谱法测定多糖的单糖组成，结果表明：多糖POPS₀中含有单糖葡萄糖和半乳糖，其摩尔比为1.76：1；多糖POPS₁中含有鼠李糖、葡萄糖和半乳糖，其摩尔比为1.61：1.12：1.4；多糖POPS₂中含有阿拉伯糖、木糖、甘露糖和半乳糖，其摩尔比为1.34：1.84：1.52：0.15；多糖POPS₃中含有木糖、葡萄糖和半乳糖，其摩尔比为1.62：1.22：1.48；多糖POPS₄中含有阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖，其摩尔比为1.22：0.67：0.41。3、研究马齿苋粗多糖（POP）的体内免疫活性。结果表明：马齿苋未脱蛋白粗多糖（POP-1）在剂量100 mg／kg下，能明显增强免疫抑制小鼠的腹腔巨噬细胞的吞噬功能（p＜0.01）；在300mg／kg下，能显著提高免疫抑制小鼠的血清溶血素水平（p＜0.001）；在100mg／kg、300mg／kg下，能增加免疫抑制小鼠的脾脏指数（P＜0.05）。马齿苋脱蛋白粗多糖POP-2在剂量300mg／kg下，能增强免疫抑制小鼠的腹腔巨噬细胞的吞噬功能（p＜0.05）；在300mg／kg下，能显著提高免疫抑制小鼠的血清溶血素水平（p＜0.001）；在100mg／kg、300mg／kg下，能明显增加免疫抑制小鼠的胸腺指数和脾脏指数（P＜0.01或p＜0.001）。4、采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）测定马齿苋粗多糖POP和纯化后多糖组分POPS₁、POPS₂、POPS₃、POPS₄对人胃癌肿瘤细胞株SGC、人（?）癌肿瘤细胞株AGS和血癌肿瘤细胞株U937的生长抑制率。结果表明，各多糖对肿瘤细胞都有一定的抑制作用。POPS₁对SGC的抑制作用最强，浓度为160μg／mL时，抑制率为49.27％；POPS₂对AGS的抑制作用最好，浓度为320μg／mL时，抑制率为26.33％；POPS₃对U937的抑制效果最明显，浓度为640μg／mL时，抑制率为66.74％。5、采用水杨酸法和DPPH法研究马齿苋多糖的体外抗氧化活性。结果显示粗多糖以及纯化后多糖都有抗氧化活性。马齿苋多糖POPS₂对羟自由基以及DPPH自由基的清除作用最好，当浓度达到960μg／mL时对羟自由基的清除率达到92.15％，对DPPH自由基的清除率为80.52％。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-10
缩写与符号  10-14
第一章绪论  14-23
  1.1 马齿苋的研究进展  14-18
    1.1.1 马齿苋的化学成分  15-16
    1.1.2 马齿苋的药理活性  16-18
  1.2 马齿苋多糖的研究进展  18-19
    1.2.1 免疫调节作用  18-19
    1.2.2 抗肿瘤作用  19
    1.2.3 抗氧化作用  19
  1.3 研究的目的和意义  19
  1.4 本论文的主要研究内容  19-20
  参考文献  20-23
第二章马齿苋多糖水提工艺的研究  23-31
  2.1 前言  23
  2.2 材料与仪器  23-24
    2.2.1 材料与试剂  23-24
    2.2.2 仪器  24
  2.3 实验方法  24-26
    2.3.1 马齿苋多糖的提取  24
    2.3.2 单因素试验  24-25
    2.3.3 正交试验  25
    2.3.4 标准曲线的绘制  25-26
    2.3.5 多糖含量的测定  26
  2.4 结果与讨论  26-30
    2.4.1 单因素试验  26-28
    2.4.2 正交试验和方差分析  28-30
  2.5 本章小结  30
  参考文献  30-31
第三章马齿苋多糖的分离纯化研究  31-50
  3.1 前言  31-32
  3.2 材料与仪器  32
    3.2.1 材料与试剂  32
    3.2.2 仪器  32
  3.3 实验方法  32-38
    3.3.1 脱色试验  32-33
    3.3.2 脱蛋白试验  33-35
    3.3.3 纯化试验  35-36
    3.3.4 分子量测定  36-37
    3.3.5 单糖组成分析  37-38
  3.4 结果与讨论  38-48
    3.4.1 脱色试验  38-39
    3.4.2 脱蛋白试验  39
    3.4.3 纯化试验  39-42
    3.4.4 分子量测定  42-46
    3.4.5 单糖组成测定  46-48
  3.5 本章小结  48-49
  参考文献  49-50
第四章马齿苋粗多糖的体内免疫活性研究  50-56
  4.1 前言  50-51
  4.2 材料与仪器  51
    4.2.1 材料与试剂  51
    4.2.2 仪器  51
  4.3 实验方法  51-53
    4.3.1 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验  51-52
    4.3.2 小鼠血清溶血素抗体生成试验  52
    4.3.3 马齿苋粗多糖POP对小鼠免疫器官脏器系数的影响  52-53
  4.4 结果与讨论  53-55
    4.4.1 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验  53
    4.4.2 小鼠血清溶血素抗体生成试验  53-54
    4.4.3 马齿苋粗多糖POP对小鼠免疫器官脏器系数的影响  54-55
  4.5 本章小结  55
  参考文献  55-56
第五章马齿苋多糖的体外活性研究  56-68
  5.1 前言  56-57
  5.2 材料与仪器  57
    5.2.1 材料与试剂  57
    5.2.2 仪器  57
  5.3 实验方法  57-59
    5.3.1 体外抗肿瘤活性试验  57-58
    5.3.2 抗氧化试验  58-59
  5.4 结果与讨论  59-66
    5.4.1 体外抗肿瘤活性试验  59-63
    5.4.2 抗氧化试验  63-66
  5.5 本章小结  66-67
  参考文献  67-68
第六章工作总结与展望  68-70
  6.1 主要工作总结  68-69
  6.2 工作展望  69-70
致谢  70-71
攻读硕士学位期间发表论文目录  71

马齿苋多糖的分离纯化及活性研究

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