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Mcl-1反义核酸对肝癌HepG2细胞的生物学特性的影响

作　者: 吴风云
导　师: 张洹；蒋建伟
学　校: 暨南大学
专　业: 内科学
关键词: 髓样 细胞白血病-1 Bcl-2家族 反义核酸 凋亡 肝癌 药物敏感性
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的:筛选Bcl-2家族ASODNs对消化系肿瘤HepG2、LOVO、MGC-803细胞增殖抑制和促凋亡作用较强的成员。将筛选出的成员Mcl-1 ASODN转染肝癌HepG2细胞,并检测该反义核酸对肝癌细胞的部分生物学功能(增殖抑制、促凋亡、提高肝癌对常用化疗药物的敏感性、基因表达)的影响,为基于Mcl-1为靶标的肝癌治疗提供实验基础。方法:第一部分筛选对肝癌、胃癌、结肠癌细胞生长抑制作用较强的Bcl-2家族成员ASODN1.WST-8法筛选出对肝癌、胃癌、结肠癌细胞增殖抑制作用较强的成员2.流式细胞术筛选出对肝癌、结肠癌细胞促凋亡作用较强的成员第二部分Mcl-1 ASODN对肝癌细胞生物学特性的影响1.WST-8法检测Mcl-1 ASODN对肝癌细胞的增殖抑制作用2.Realtime PCR检测Mcl-1 ASODN对肝癌细胞Mcl-1 mRNA的影响3.Hoechst 33258染色观察Mcl-1 ASODN对肝癌细胞形态的影响4.PI单染流式细胞术检测Mcl-1 ASODN对肝癌细胞周期的影响5.PI-Annexin V双染流式细胞术检测Mcl-1 ASODN对肝癌细胞凋亡的影响6.WST-8法检测Mcl-1 ASODN对肝癌细胞化疗(顺铂和表柔比星)敏感性的影响结果:第一部分筛选对肝癌、胃癌、结肠癌细胞生长抑制作用较强的bcl-2家族成员ASODN1.在Bcl-2家族各成员的ASODNs中,Bcl-xl ASODN和Mcl-1 ASODN对肝癌,结肠癌及胃癌细胞的增殖抑制作用最强2.在Bcl-2家族各成员的ASODNs中,Bcl-xl ASODN和Mcl-1 ASODN对肝癌和结肠癌细胞的促凋亡作用最强第二部分Mcl-1 ASODN对肝癌细胞生物学特性的影响1.Mcl-1 ASODN作用于肝癌细胞48h后,Mcl-1 ASODN能有效下调肝癌细胞中的mcl-1 mRNA的表达,且0.25μmol/L的浓度就开始起作用,随着浓度的升高,下调作用就越强,表达抑制率可高达80%2.Mcl-1 ASODN作用于肝癌细胞48h后,能有效抑制肝癌细胞的增殖,与随机寡核苷酸对照组(RODN)相比,差异具有统计学意义,随着浓度的升高,增殖抑制率越高,0.25μmol/L时增殖抑制率为29.66%,1.0μmol/L时为52.36%3.Mcl-1 ASODN作用于肝癌细胞48h后,Hoechst 33258染色可以观察到细胞出现明显的细胞核碎裂,边集,凋亡小体形成等凋亡形态学的改变4.各组药物作用于肝癌细胞48h后,与空白对照(control)组相比,Mcl-1ASODN组S期细胞明显增多,出现明显的S期阻滞。5.各组药物作用于肝癌细胞48h后,与control组相比,Mcl-1 ASODN组早期凋亡率明显增高,凋亡率达13.6%;而RODN组早期凋亡率只有2.8%6.药敏实验结果(1)单独顺铂IC50为27.5μg/mL,顺铂与0.25μmol/L Mcl-1 ASODN联用后,IC50为7.26μg/mL,IC50提高了3.79倍,利用金正均Q概率和法得出Q值＞1.15,说明它们之间具有协同作用(2)单独表柔比星IC50为1.54μg/mL,表柔比星与0.25μmol/L Mcl-1 ASODN联用后,IC50为0.48μg/mL,IC50提高了3.21倍,利用金正均Q概率和法得出Q值＜1.15,说明它们之间只具有相加作用。结论:1.在HepG2、MGC-803和LOVO细胞中,均显示Bcl-xl ASODN和Mcl-1ASODN的增殖抑制作用和促凋亡作用较强,Bcl-2 ASOND次之(在HepG2细胞中无作用),Bcl-w ASODN和A1 ASODN作用较弱2.Mcl-1 ASODN能有效抑制肝癌细胞mcl-1 mRNA的表达,并抑制肝癌细胞增殖,将其阻滞在S期,并促进其凋亡3.Mcl-1 ASODN能提高肝癌细胞对顺铂和表柔比星的敏感性

全文目录


中文摘要  4-7
Abstract  7-10
目录  10-11
前言  11-23
技术路线图  23-24
第一部分 Bcl-2家族ASODNs对消化系肿瘤细胞生长抑制作用最强成员的筛选  24-37
  实验材料和方法  24-28
  实验结果  28-35
  讨论  35-36
  结论  36-37
第二部分 Mcl-1 ASODN对肝癌HepG2细胞增殖与凋亡的影响  37-52
  实验材料和方法  37-41
  实验结果  41-49
  讨论  49-51
  结论  51-52
全文结论  52-53
展望  53-54
参考文献  54-64
主要英文缩略词  64-65
发表文章  65-66
致谢  66

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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