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脐血间充质干细胞体外培养及其对同种异体淋巴细胞增殖的影响

作　者: 丛舒
导　师: 申斯乐；张雪梅
学　校: 吉林大学
专　业: 生物工程
关键词: 脐带血间充质干细胞体外
分类号: Q813
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:建立更适合于人脐血MSC的分离和培养的方法,观察HUCB-derived MSCs生长特性、细胞化学特征,了解HUCB-derived MSCs的免疫调控作用。方法:用红细胞裂解法加贴壁法分离纯化HUCB-derived MSCs;不同培养条件筛选更适合于人脐血MSC的培养方法;用光学显微镜观察其形态特征:用胎盘蓝染色法了解其生长曲线并计算出其倍增时间;通过细胞化学染色进一步了解其细胞化学特征;采用MTT比色法检测HUCB-derived MSCs对同种异体脐血淋巴细胞增殖的影响。结果:用红细胞裂解法加贴壁法分离和初步纯化了HUCB-derived MSCs。用胎牛血清包被培养瓶(板)可以明显提高HUCB-derived MSCs的贴壁率,培养基中含5% FBS比含2% FBS和10% FBS更有利于HUCB-derived MSCs的产生。当胎牛血清浓度为2%时,未包被组/包被组= 0% / 5.6% ,胎牛血清浓度为5%时,未包被组/包被组=16.7% / 27.8% ,胎牛血清浓度为10%时,未包被组/包被组=16.7% / 22.2%。HUCB-derived MSCs的形态为成纤维细胞样,呈梭形或纺锤形。体外培养1-8天内,细胞数量随着时间的延长而逐渐增加。细胞倍增时间为56.6h。细胞化学染色显示PAS(+),NBE (+)。HUCB-derived MSCs对同种异体脐血淋巴细胞增殖能力具有抑制作用,其抑制程度与接种的脐血淋巴细胞数与HUCB-derived MSCs数的比例有关。与无HUCB-derived MSCs的对照组相比较,当接种的脐血淋巴细胞数与HUCB-derived MSCs数的比例为100:1时,抑制率为21.3% ,而当接种的脐血淋巴细胞数与HUCB-derived MSCs数的比例为50:1时,其抑制率达53.3%。结论:1.用裂解法加贴壁法能够成功分离和初步纯化HUCB-derived MSCs,且较通常采用的离心法加贴壁法更省时省力,费用大大减低,污染机会很少。2.用胎牛血清包被培养瓶(板)可以明显提高HUCB-derived MSCs的贴壁率,培养基中含5% FBS比含2% FBS和10% FBS更有利于HUCB-derived MSCs的产生。3.通过细胞形态学和细胞生长曲线、细胞倍增时间以及细胞化学染色特征的观察,可以认定为HUCB-derived MSCs。4. HUCB-derived MSCs具有免疫负调控作用,能抑制同种异体淋巴细胞的增殖,同时,此种抑制作用与接种的脐血淋巴细胞数与HUCB-derived MSCs数的比例有关。

全文目录

内容提要  4-8
英文缩略词  8-9
第1章前言  9-16
  一、干细胞  9-11
  二、间充质干细胞(Mesenchymal stem cell, MSC)  11-16
第2章材料与方法  16-24
  1. 材料  16-17
    1.1 主要试剂  16
    1.2 主要器材及设备  16-17
    1.3 脐血  17
  2. 实验方法  17-23
    2.1 脐血MSC 培养体系的建立  17-18
    2.2 HUCB-derived MSCs 生长曲线与倍增时间  18-19
    2.3 HUCB-derived MSCs 细胞化学染色  19-22
    2.4 HUCB-derived MSCs 对同种异体脐血淋巴细胞转化能力的影响  22-23
  3. 统计学分析  23-24
第3章结果与分析  24-34
  1. HUCB-derived MSCs 形态学观察  24-28
  2. 不同培养条件对 HUCB-derived MSCs 阳性率的影响  28
  3. HUCB-derived MSCs 生长曲线与倍增时间  28-30
  4. HUCB-derived MSCs 细胞化学染色  30-32
  5. HUCB-derived MSCs 对同种异体脐血淋巴细胞转化能力的影响  32-34
第4章讨论  34-37
第5章结论  37-38
参考文献  38-42
致谢  42-43
中文摘要  43-46
ABSTRACT  46-49

脐血间充质干细胞体外培养及其对同种异体淋巴细胞增殖的影响

内容摘要

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