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THAP11与PCBP1相互作用的分子机制及其生物学功能研究

作　者: 张同
导　师: 杨晓明
学　校: 天津大学
专　业: 制药工程
关键词: THAP11 PCBP1 CD44v 可变剪接 NF-κB Ras信号通路
分类号: Q51
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

THAP11属于新发现的THAP蛋白质家族成员。该家族因含有与果蝇P元件转座酶DBD高度同源的THAP结构域而得名。研究表明这是一类锌离子依赖的DNA结合蛋白质,广泛参与细胞增殖、凋亡调控,并可能与染色体修饰/重构相关。本实验室前期研究表明THAP11可通过直接结合c-Myc启动子区抑制c-Myc表达,进而抑制细胞生长。对其作用机制及进一步的功能研究尚无报道。为深入研究THAP11功能,我们以其相互作用蛋白质作为切入点,利用酵母双杂交技术,从成人肝脏cDNA文库中筛选到THAP11相互作用蛋白质PCBP1。PCBP1是核内不均一核糖核蛋白家族成员,具有RNA结合活性,可直接参与调控mRNA的可变剪接,提示THAP11可能也参与mRNA的剪接过程。本文首先利用免疫共沉淀技术,确定了THAP11与PCBP1的相互作用区域。鉴于CD44的可变剪接与肿瘤发生、发展的关系越来越明确,是研究可变剪接与人类疾病关系的经典模型,我们对两者在CD44 mRNA剪接中的作用进行了深入研究,发现PCBP1可抑制HepG2细胞内源及外源CD44可变剪接体的表达,而siRNA实验表明THAP11相对特异的抑制v3, v5、v6、v8等肿瘤发生相关的可变剪接体的表达,其功能发挥依赖于PCBP1。过表达THAP11可抑制由Ras激活引起的CD44可变剪接体v5、v6(CD44v5、v6)的上调,进而抑制肿瘤侵袭与转移,RNAi干涉掉内源THAP11后CD44v水平上升,HepG2侵袭能力增强。利用Real-time PCR分析发现,CD44v6与THAP11在临床肝癌病人组织中的表达存在负相关。以上结果表明THAP11可通过抑制CD44可变剪接进而抑制肝癌侵袭、转移,该蛋白与PCBP1的相互作用可能是其发挥作用的重要方式。此外,我们还发现THAP11/PCBP1可以抑制NF-κB转录活性,以及NF-κB下游基因IL-6启动子的活性,其机制与影响NF-κB的DNA结合活性无关。上述研究揭示了THAP11参与mRNA可变剪接的新功能,为认识THAP家族蛋白质新的功能提供了重要的线索,同时,加深了我们对THAP11调控肿瘤细胞恶性表型,作为一种新的候选抑癌基因的认识。

THAP11与PCBP1相互作用的分子机制及其生物学功能研究

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