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HIV-1整合酶链转移反应抑制剂筛选模型的构建与应用

作　者: 张大为
导　师: 郭顺星
学　校: 北京协和医学院
专　业: 生药学
关键词: 人类免疫缺陷病毒 整合酶 抑制剂筛选 内生真菌
分类号: R512.91
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 59次
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内容摘要


人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的获得性免疫缺陷综合征(艾滋病)是人类历史上最严重、最致命的疾病之一。艾滋病目前仍然不能治愈。HIV编码的整合酶(IN)介导病毒DNA与宿主细胞基因组整合,是病毒复制所必需的关键酶之一,抑制IN的功能能够有效阻断病毒在宿主细胞内的复制。同时,由于正常人体细胞中没有IN的功能类似物,特异性作用于IN的抑制剂对人体的副作用可能很小,被认为是抗HIV药物研发的理想靶点。目前,IN抑制剂筛选主要以链转移反应为靶标。本研究使用Overlap PCR合成了HIV-1 HXB2CGIN的基因序列,并引入了F185K/C280S可溶性突变以提高蛋白溶解性。将目的基因连接到pET28a表达载体中,在大肠杆菌BL21中实现了高效且可溶性表达。通过亲和层析的方法,从细胞破碎上清液中纯化到重组IN蛋白。应用文献报道的高通量ELISA鉴定了重组IN蛋白的链转移反应活性,证明了重组IN蛋白具有链转移反应活性。应用三个参数评价并证明了使用重组IN蛋白的链转移高通量ELISA具有高特异性、高灵敏度和高效性。使用了一个已知IN抑制剂baicalein证明了本研究所采用的高通量ELISA方法能够有效应用于针对IN链转移反应活性的抑制剂筛选。应用链转移高通量ELISA从148个药用植物内生真菌发酵产物提取物中筛选得到了5个能够有效抑制IN链转移活性的样品。

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 传染病 > 病毒传染病 > 获得性免疫缺陷综合征（AIDS艾滋病）
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