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猕猴桃溃疡病鉴定及内生拮抗真菌的筛选

作　者: 燕金宜
导　师: 张敏
学　校: 四川农业大学
专　业: 植物病理学
关键词: “红阳”猕猴桃 内生真菌 猕猴桃细菌性溃疡病 生物防治
分类号: S436.634
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


四川是中国猕猴桃主要生产区域,然而自2011年以来其主要品种“红阳”红心猕猴桃遭受猕猴桃细菌性溃疡病的感染,造成巨大经济损失。猕猴桃细菌性溃疡病是一种猕猴桃的毁灭性细菌病害,难于防治。大量研究表明,植物内生真菌定植在植物组织内,某些内生真菌菌株表现出良好的抗细菌性,许多内生真菌已作为生物防治剂、固氮菌剂和植物促生制剂,广泛应用于实验室、温室和大田,是植物病害生物防治的潜在资源菌,在生物防治、医药卫生等领域的应用潜力非常大,都江堰“红阳”猕猴桃种植园中有一株猕猴桃植株在该园大面积爆发溃疡病时仍为健康的植株,因此本研究对“红阳”猕猴桃细菌性溃疡病病原菌进行了分离、鉴定以及生理生化指标的测定,同时对该健康的“红阳”猕猴桃植株的内生真菌进行了分离、鉴定以及测试内生真菌对“红阳”猕猴桃细菌性溃疡病病原菌的拮抗效果,以期找到对“红阳”猕猴桃细菌性溃疡病有较好防治效果的猕猴桃内生真菌菌株,主要研究结果如下：1猕猴桃溃疡病病原菌的分离鉴定：从采自都江堰,雅安,什邡的“红阳”猕猴桃细菌性溃疡病病株的菌脓中分离到猕猴桃细菌性溃疡病病原菌,经过测定鉴定其为丁香假单胞菌猕猴桃致病变种(Pseudomonas syringae actinidiae)。2一株健康的猕猴桃植株内生真菌的分离及鉴定：从猕猴桃植株叶片上分离出内生真菌14个,分别属于以下属：Penicillium sp. Colletotrichum sp. Phomopsis sp. Alternaria sp. and Nigrospora sp.。从猕猴桃植株枝条上分离出内生真菌8个,分别属于以下属：Alternaria sp. Nigrospora sp. Phomopsis sp. and Sordaria sp.。叶片中的内生真菌在数量上和种类上都丰富于枝条上的内生真菌。3一株内生真菌Nigrospora sp.(J2)表现出对猕猴桃细菌性溃疡病病原菌较好的抗性,其抑菌圈大小为15mm,表现为高敏,继代7次后抑菌圈大小为12mm,具有较好的遗传稳定性,具有进一步开发成生物防治菌株的潜力。4在细菌性病害的病原菌提取方面,一般通用做法为从植物组织枝干中提取,然而,从病枝组织中分离病原菌往往会受到植株内生菌的影响,某些内生菌与病原菌在形态上非常相似,从而在筛选过程中增加了许多工作量。因此本实验初步尝试从菌脓中分离病原菌,能在很大程度上降低病原菌外其他菌株的干扰问题,该方法方便快捷,能有效提高分离病原菌的便捷程度和工作效率。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-11
第一章 文献综述  11-21
  1 猕猴桃的研究现状  11-14
    1.1 猕猴桃的经济价值  11
    1.2 四川“红阳”猕猴桃简介  11-12
    1.3 猕猴桃溃疡病的研究现状  12-14
    1.4 “红阳”猕猴桃细菌性溃疡病防治现状  14
  2 内生真菌作为生物农药的研究现状  14-19
    2.1 生物农药  14-15
    2.2 植物内生真菌  15-19
      2.2.1 植物内生真菌定义  15-16
      2.2.2 植物内生真菌与寄主植物之间关系  16
      2.2.3 植物内生真菌的医学活性研究  16-17
      2.2.4 植物内生真菌的农药活性研究  17-19
  3 立题依据  19-21
第二章 “红阳”猕猴桃细菌性溃疡病病原菌的分离鉴定及生理生化指标的测定  21-34
  1 材料和仪器  21-22
    1.1 试验材料  21
    1.2 试剂  21
    1.3 仪器  21-22
    1.4 培养基  22
  2 试验方法  22-25
    2.1 “红阳”猕猴桃细菌性溃疡病病原菌的分离  22-23
    2.2 “红阳”猕猴桃细菌性溃疡病病原菌的鉴定  23-25
      2.2.1 致病性测试  23
      2.2.2 形态特征和培养性状的观察  23-24
      2.2.3 病原菌的生理生化测定  24-25
      2.2.4 分子生物学方法鉴定  25
  3 结果与分析  25-31
    3.1 “红阳”猕猴桃细菌性溃疡病病原菌的分离  25
    3.2 “红阳”猕猴桃细菌性溃疡病病原菌的鉴定  25-31
      3.2.1 致病性测试  26
      3.2.2 形态特征和培养性状的观察  26-28
      3.2.3 病原菌的生理生化测定  28-30
      3.2.4 分子生物学方法鉴定  30-31
  4 讨论  31-34
    4.1 “红阳”猕猴桃细菌性溃疡病病原菌的提取  32
    4.2 “红阳”猕猴桃细菌性溃疡病病原菌的鉴定  32-34
第三章 “红阳”猕猴桃内生真菌的提取鉴定及多样性分析  34-48
  1 材料和仪器  34-35
    1.1 试验材料  34
    1.2 试剂  34
    1.3 仪器  34
    1.4 培养基  34-35
  2 试验方法  35-36
    2.1 内生真菌的分离  35
      2.1.1 表面消毒  35
      2.1.2 内生真菌的多样性比较  35
    2.2 内生真菌的纯化  35-36
    2.3 内生真菌的鉴定  36
      2.3.1 培养性状观察  36
      2.3.2 分子生物学方法鉴定  36
  3 试验结果  36-45
    3.1 内生真菌的分离  36-37
    3.2 “红阳”猕猴桃内生真菌多样性探讨  37
    3.3 猕猴桃内生真菌鉴定  37-45
      3.3.1 培养性状观察  37-38
      3.3.2 分子生物学方法鉴定  38-45
  4 讨论  45-48
    4.1 内生真菌的分离  45-46
    4.2 内生真菌的多样性  46-48
第四章 “红阳”猕猴桃内生真菌对猕猴桃细菌性溃疡病病原菌拮抗效果测试  48-52
  1 材料和仪器  48-49
    1.1 试验材料  48
    1.2 试剂  48
    1.3 仪器  48
    1.4 培养基  48-49
  2 试验方法  49-50
    2.1 菌悬液制备  49
    2.2 液体发酵  49
    2.3 抑菌活性测定  49
    2.4 拮抗菌稳定性测试  49-50
  3 结果与分析  50-52
  4 讨论  52
内生真菌研究的问题与展望  52-54
致谢  54-55
参考文献  55-59

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中图分类: > 农业科学 > 植物保护 > 病虫害及其防治 > 园艺作物病虫害及其防治 > 果树病虫害 > 浆果类病虫害 > 猕猴桃病虫害
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