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爱普利诺菌素对小鼠成神经母瘤细胞（N2a）的毒性作用

作　者: 张银花
导　师: 陈武；孙英健
学　校: 中国农业科学院
专　业: 兽医
关键词: 爱普利诺菌素 P-glycoprotein 细胞增殖神经毒性
分类号: S859.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

爱普利诺霉素eprinomycin (EPR)属于阿维菌素类(avermectin, AVMs)家族的成员,与AVM同属于大环内酯类抗生素,是广泛使用的抗寄生虫药物和农用杀虫剂。EPR是目前在奶牛体内允许使用的抗寄生虫药物。其作用机制与阿维菌素类药物相似,即AVMs作用于神经细胞的γ-氨基丁酸门控氯通道(y-aminobutyric acid (GABA)-gated chloride channels)和谷氨酸门控氯通道(glutamate-gated chloride channels)从而使动物山现神经肌肉麻痹等症状。然而,这一理论还不能很好地解释AVMs对敏感动物的毒性作用、对线虫不同发育阶段的幼虫毒性以及药物浓度、时间依赖的神经肌肉麻痹的表现。这提示有关AVMs的作用机制有待进一步研究。本文研究了EPR对N2a细胞内Cl-浓度的变化,对细胞内ATP酶活性的影响和对细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响,并用多药物耐药蛋白—P-糖蛋白(P-glycoprotein, Pgp)稳定低表达的N2a细胞研究Pgp蛋白在EPR对细胞增殖活性、细胞周期和细胞凋亡的影响中所起的作用。EPR对N2a细胞内C1‘浓度的影响和ATP酶活性的影响的结果显示EPR处理1h后,随着药物浓度的增加,细胞内C1-浓度明显增加,但EPR处理24h后,细胞内C1浓度的变化不明显,这提示药物引起细胞内Cl浓度的增加可能只山现在药物作用的初期。EPR能明显降低N2a细胞内总ATP酶的活性并且主要是降低Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性。本文利用Pgp低表达的N2a细胞系N2a/shRNA-Pgp检测了AVMs对不同Pgp表达细胞的增殖和凋亡的影响。结果发现,EPR能显著抑制N2a神经细胞的增殖,并在高药物浓度引起细胞的死亡。EPR对细胞周期的影响研究,发现EPR能抑制N2a细胞增殖,延缓细胞周期的进程,EPR使N2a细胞周期阻滞在G1期,并随着药物作用浓度的提高和作用时间的延长细胞进程阻滞的更为明显。以荧光染料33258染色在荧光显微镜下观察细胞核的变化,发现所测定的EPR可引起细胞核的形态改变,但未见细胞凋亡小体,同时用AnnixinV-FITC/PI试剂盒检测EPR对细胞凋亡的影响,未见明显的细胞凋亡的产生。由此可见,EPR诱发的细胞增殖抑制的毒性机制可能与药物对细胞周期的影响有关。EPR对Pgp蛋白低表达的N2a/shRNA-Pgp细胞系增殖的抑制与正常细胞没有显著差异,但Pgp的低表达能明显减缓细胞周期的进程,提示Pgp的低表达能增加EPR对N2a细胞的毒性作用强度。

爱普利诺菌素对小鼠成神经母瘤细胞（N2a）的毒性作用

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