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重组人生长激素纯化研究

作　者: 李广辉
导　师: 王英武
学　校: 吉林大学
专　业: 生物工程
关键词: 重组人生长激素洗脱液性早熟浓度脑垂体前叶重度烧伤种属特异性 hormone 纯化过程脂肪的代谢缓冲体系一级结构纯化技术二硫键机体免疫力抗衰老 rhGH 分子量主成分糖类
分类号: R914
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

人生长激素(human growth hormone, hGH)是由脑垂体前叶嗜酸性粒细胞所分泌由191个氨基酸构成的肽类激素,分子量约22125道尔顿,无糖基化,链内有四个Cys,形成两对二硫键(C54-C165,C182-C189),是人体内一种具有广泛生理功能的激素。生长激素能影响几乎所有的组织类型和细胞,甚至包括免疫组织、脑组织及造血系统,其主要作用是刺激骨、软骨细胞的生长和分化,调节蛋白质、糖类及脂肪的代谢,具有一定的种属特异性。分泌型基因重组人生长激素的氨基酸含量、一级结构及空间构象与人体自身分泌的生长激素完全相同,具有与人体内源生长激素同等的作用。在临床上,生长激素已经应用于因内源性生长激素缺乏所引起的儿童生长缓慢、性早熟治疗、重度烧伤治疗等等。目前又进入另一新领域——倍受女性喜爱的美容领域。由于生长激素具有加速新陈代谢、修复受损组织、抗衰老、提高机体免疫力等作用,而倍受美容界的青睐。为了让患者得到更好的治疗效果,我们通过改变纯化过程中缓冲体系等实验对重组人生长激素的下游纯化技术进行优化,从而提高了产品质量。在实验中,我们逐步确立了洗脱液的缓冲体系、盐浓度、pH等条件,最终得出10mMTE、0.05M NaCl、pH7.0的洗脱体系,在此体系下,重组人生长激素主成分与相关蛋白分离效果最好。

全文目录

内容提要  6-7
引言  7
1. 重组人生长激素的相关生物学背景  7-9
  1.1 重组人生长激素的历史  7
  1.2 重组人生长激素的分子结构  7-8
  1.3 重组人生长激素的重理作用  8-9
2. 研究重组人生长激素纯化的意义  9
3. 重组人生长激素的不稳定性  9-11
  3.1 引起多肽不稳定性的原因  9-10
  3.2 重组人生长激素分子(rhGH)的物理化学变化  10-11
4. 主要研究工作  11-13
第一章实验材料  13-18
  1. 试剂  13
    1.1 HPLC试剂  13
    1.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳试剂  13
    1.3 菌体  13
    1.4 纯化试剂  13
  2. 主要仪器  13-14
    2.1 生产用主要仪器  13-14
    2.2 检测用主要仪器  14
  3. 溶液  14-18
    3.1 检测用溶液  14-16
    3.2 纯化用溶液  16-18
第二章生组人生长激素洗脱梯度的摸索  18-33
  1. 多肽类药物概述  18-19
    1.1 缓冲液  18
    1.2 缓冲体系pH值  18
    1.3 盐浓度  18-19
  2. 重组人生长激素洗脱液设计及相关蛋白和含量的考察  19-33
    2.1 所需rhGH的处理  19-20
      2.1.1 菌体处理  19
      2.1.2 裂解液超滤  19
      2.1.3 盐析操作  19
      2.1.4 脱盐操作  19-20
    2.2 DEAE层析  20-32
      2.2.1 缓冲液的选择  20-23
      2.2.2 缓冲体系pH值  23-27
      2.2.3 盐浓度的确定  27-32
    2.3 结果与讨论  32-33
总结  33-34
参考文献  34-36
摘要  36-37
Abstract  37-38
致谢  38

重组人生长激素纯化研究

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