学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

基于原子力显微术对B淋巴细胞形貌结构及生物力学研究

作　者: 王秋兰
导　师: 蔡继业
学　校: 暨南大学
专　业: 分析化学
关键词: 原子力显微镜 B淋巴细胞慢性淋巴白血病超微结构生物力学
分类号: R318.01
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 51次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

本文基于原子力显微镜,结合量子点标记技术、激光扫描共聚焦显微镜以及流式细胞仪等生物检测技术和密度梯度离心法、阳性和阴性磁珠分选法等分离方法,以正常健康人和慢性淋巴白血病患者的外周血B淋巴细胞作为研究对象,在高分辨的纳米尺度下从不同角度研究这两种细胞的生物物理特性,即细胞形态及膜纳米结构、膜表面粘附特性、杨氏模量、抗原-抗体之间特异性相互作用力、膜表面抗原分子的分布情况等。主要获得了以下具有创新性的成果：1)与正常B淋巴细胞相比,慢性淋巴白血病B淋巴细胞高大,膜表面纳米结构更加粗糙,非特异性粘附力和硬度都明显减小。通过修饰CD20抗体的AFM针尖测出CD20抗原-抗体的相互作用力比未修饰抗体针尖测得的非特异性粘附力大5倍,并依据抗原抗体特异性作用力的测量,得出CD20分子在正常CD20+B淋巴细胞膜上分布比较均匀,小部分有聚集现象,相反,在慢淋CD20+B淋巴细胞膜表面分布稀疏。表明应用AFM可在形态学和机械性能上明显区分正常和慢性淋巴白血病B淋巴细胞,为临床诊断慢性淋巴白血病提供新的手段,B淋巴细胞上的CD20分布可以作为抗原CD20用药选择参考。2)随着超抗原SAC刺激时间增加,1.2h到72h慢淋B淋巴细胞体积、直径以及核质比明显增大,24h出现伪足和免疫突触现象。活化过程中细胞膜表面纳米结构分子经过了从疏松到进一步集聚以及最后形成微结构域的变化过程,细胞粒度分布和粗糙度等参数也发生明显变化,细胞粘附力增加。这对深入地了解慢淋B淋巴细胞在功能缺陷下活化过程中形态生物力学特性等变化提供可视化依据。3)与静息B淋巴细胞相比,抗原PWM或SAC刺激24h后的B淋巴细胞表面标记分子的表达如CD69明显增加,细胞处在早期活化阶段,并且出现BCR信号传导加强,细胞骨架发生运动以及关键蛋白F-actin表达的增加,导致了一系列生物物理特性变化包括细胞形态上高度、直径和体积不同程度的变化、超微结构上蛋白发生聚集以及表面粘附力明显增加2到3倍,并且细胞膜发生去极化现象。这为能够为深入理解B淋巴细胞活化过程提供新的信息和结构功能分析。以上创新性成果为生物、临床、免疫等方面的B淋巴细胞研究提供了一定的方法以及数据参考价值。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-7
目录  7-9
第一章绪论  9-23
  第一节原子力显微镜简介  9-12
    1.1 原子力显微镜的山来  9-10
    1.2 原子力显微镜的基本原理  10
    1.3 原子力显微镜的工作模式  10-12
  第二节在原子力显微镜在细胞成像方面的应用  12-14
    2.1 研究单细胞的意义  12-13
    2.2 单细胞成像  13-14
  第三节 AFM单分子力谱测量在细胞方面的应用  14-17
    3.1 测定细胞粘附力和弹性  14-15
    3.2 单分子力谱在细胞特异性分子相互作用中的应用  15-17
  展望  17-18
  研究创新点和意义  18-19
  参考文献  19-23
第二章原子力显微镜探测人正常和慢淋B淋巴细胞  23-34
  1 引言  23
  2 试剂材料与方法  23-25
    2.1 试剂材料  23
    2.2 仪器  23
    2.3 细胞样品制备  23-24
    2.4 AFM样品制备  24
    2.5 原子力显微镜扫描  24
    2.6 数据统计  24-25
  3 结果与讨论  25-30
    3.1 原了力显微镜对正常和慢淋B淋巴细胞的形貌与膜纳米结构的表征  25-27
    3.2 原了力显微镜测定正常和慢淋B淋巴细咆的力学性质  27-29
    3.3 正常和慢性淋巴白血病B淋巴细胞的杨氏模量分析  29-30
  小章小结  30-31
  参考文献  31-34
第三章 B淋巴细胞膜CD20抗原的分布与单分子力谱探测  34-44
  1 引言  34
  2 材料和方法  34-36
    2.1 试剂和仪器  34-35
    2.2 方法  35-36
  3 结果与讨论  36-40
    3.1 正常和B-CLL外周血CD20~+B淋巴细胞的荧光成像  36-37
    3.2 正常和B-CLL外周血CD20~+B淋巴细胞形态及CD20抗原-抗体特异性相互作用力的AFM分析  37-40
  本章小结  40-41
  参考文献  41-44
第四章 SAC刺激慢性淋巴白血病B淋巴细胞的原子力观察  44-56
  1 引言  44
  2 材料和方法  44-46
    2.1 材料和仪器  44-45
    2.2 细胞分离培养  45
    2.3 AFM样品制备  45
    2.4 增殖实验  45
    2.5 原子力显微镜成像及力谱测定  45
    2.6 数据统计  45-46
  3 结果与分析  46-51
    3.1 CCK-8细胞增殖实验  46
    3.2 刺激细胞形貌分析  46-49
    3.3 刺激B淋巴细胞超微结构分析  49-50
    3.4 B淋巴细胞膜纳米力学性能测量  50-51
  4 讨论  51-52
  本章小结  52-53
  参考文献  53-56
第五章有丝分裂原诱导的B淋巴细胞形貌及生物力学分析  56-75
  1 引言  56
  2 材料和方法  56-60
    2.1 材料  56-57
    2.2 细胞培养  57
    2.3 纯化B淋巴细胞  57-58
    2.4 扫描激光共聚焦显微镜  58
    2.5 细胞染色和流式细胞分析  58-59
    2.6 原子力显微镜成像及力学测定  59
    2.7 数据统计  59-60
  3 结果与讨论  60-70
    3.1 倒置荧光显微镜观察B淋巴细胞  60
    3.2 抗原诱导B淋巴细胞活化  60-62
    3.3 细胞周期检测  62
    3.4 细胞内钙离子浓度检测  62-63
    3.5 静息和活化B淋巴细胞形貌和纳米结构变化  63-67
    3.6 活化B淋巴细胞的粘附力变化  67-68
    3.7 细胞骨架蛋白F-actin检测  68-69
    3.8 细胞膜电位检测  69-70
  本章总结  70-72
  参考文献  72-75
附录1 英文缩略语表  75-76
附录2 攻读硕士学位期问参加科研工作基本情况  76-78
致谢  78

基于原子力显微术对B淋巴细胞形貌结构及生物力学研究

内容摘要

全文目录

相似论文