学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

阿魏酸酯酶基因工程菌的构建及其酶学性质的研究

作　者: 蒋振彦
导　师: 张桂荣
学　校: 吉林大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 阿魏酸酯酶对硝基苯酚阿魏酸酯克隆
分类号: TQ925
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 108次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

阿魏酸酯酶是一类能够将阿魏酸从细胞壁多糖、阿魏酸甲酯、低聚糖阿魏酸酯中释放出来的酶,而阿魏酸则是很多种药物的重要组成成分；阿魏酸酯酶还是纤维素酶的限速酶,在生物质能源和药物中间体的制备方面有很大的应用前景。本研究旨在利用未培养微生物的阿魏酸酯酶基因,获得高活性的阿魏酸酯酶。利用NCBI基因库,确定拟克隆的阿魏酸酯酶基因,提取mRNA,建立cDNA文库,进行阿魏酸酯酶基因的克隆,构建pET28a(+)-FAE表达载体,转入BLp感受态细胞中,加入IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE电泳检测蛋白,测定其分子量为40KDa左右。利用对硝基苯酚阿魏酸酯作为底物,测定其比活力为2805mU/mg。最适温度为40℃,最适pH值为6.4,最适底物浓度为0.6mmol/L(?)。利用重组的阿魏酸酯酶进行水解玉米种皮的应用研究,建立了气相色谱检测阿魏酸的方法。

全文目录

内容提要  4-9
第一章前言  9-18
  1.1 阿魏酸酯酶的简介  9-12
    1.1.1 阿魏酸酯酶分类  9-10
    1.1.2 阿魏酸酯酶特性  10-12
  1.2 阿魏酸酯酶的研究进展  12-17
    1.2.1 阿魏酸酯酶来源  12-14
    1.2.2 阿魏酸酯酶的结构  14-15
    1.2.3 阿魏酸酯酶的应用  15-17
  1.3 本研究立题依据及意义  17-18
第二章阿魏酸酯酶基因的克隆及表达  18-37
  2.1 引言  18
  2.2 仪器与材料  18-20
    2.2.1 主要仪器  18-19
    2.2.2 实验材料  19-20
    2.2.3 溶液配制  20
  2.3 实验方法  20-28
    2.3.1 引物设计  20-21
    2.3.2 总RNA的提取  21
    2.3.3 总RNA的鉴定  21-22
    2.3.4 RT-PCR  22-23
    2.3.5 重组质粒的构建  23-27
    2.3.6 SDS-PAGE电泳  27-28
  2.4 结果与讨论  28-35
    2.4.1 引物设计  28-30
    2.4.2 总RNA的提取及鉴定  30-31
    2.4.3 RT-PCR结果  31
    2.4.4 质粒提取结果  31
    2.4.5 胶回收检测  31-32
    2.4.6 双酶切目的基因检测  32-33
    2.4.7 PCR鉴定  33
    2.4.8 重组质粒测序结果  33-35
    2.4.9 蛋白电泳结果  35
  2.5 本章小结  35-37
第三章阿魏酸酯酶酶学性质及动力学测定  37-47
  3.1 引言  37
  3.2 仪器与材料  37-38
    3.2.1 主要仪器  37
    3.2.2 实验材料  37-38
    3.2.3 溶液配制  38
  3.3 实验方法  38-41
    3.3.1 对硝基苯酚阿魏酸酯(pNPF)的合成  38-39
    3.3.2 酶活力及动力学测定  39-40
    3.3.3 最适反应条件的研究  40-41
  3.4 结果与讨论  41-46
    3.4.1 对硝基苯酚阿魏酸酯的检测分析  41-43
    3.4.2 酶活力及动力学测定  43-44
    3.4.3 最适反应条件的测定  44-46
  3.5 本章小结  46-47
第四章阿魏酸酯酶水解玉米种皮的研究  47-53
  4.1 引言  47
  4.2 仪器与材料  47-48
    4.2.1 主要仪器  47
    4.2.2 实验材料  47-48
    4.2.3 溶液配制  48
  4.3 实验方法  48-49
  4.4 结果与讨论  49-52
    4.4.1 阿魏酸标准曲线  49-51
    4.4.2 样品的气相色谱测定结果  51-52
  4.5 本章小结  52-53
第五章展望  53-54
附录  54-55
参考文献  55-63
中文摘要  63-64
Abstract  64-66
致谢  66

阿魏酸酯酶基因工程菌的构建及其酶学性质的研究

内容摘要

全文目录

相似论文