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金匮肾气丸对衰老模型小鼠端粒酶的影响

作　者: 万向
导　师: 马跃
学　校: 西南大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 金匮肾气丸衰老 TE TERT ELISA 实时荧光定量RT-PCR
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

本课题在总结传统中医对衰老的认识与探讨的基础上,结合抗衰老的现代研究机制,对祖国医学中具有温补肾阳功效的金匮肾气丸进行抗衰老机制的实验研究,为中医药抗衰老提供实验研究依据。方法：(1)造模和治疗：分别给模型对照组、试验组小鼠颈部皮下注射D-半乳糖溶液(100mg/kg),同时给正常对照组小鼠颈部皮下注入相应体积的生理盐水,每日一次,连续42天。同时,试验组从造模第8天开始,每天给予金匮肾气丸水煎液灌胃(1.17g/kg),一天一次,连续35天给药。(2)D-半乳糖衰老模型小鼠的评价：观测小鼠的一般体征、体重和血清的总抗氧化能力(T-AOC)。(3)组织中端粒酶(TE)含量的测定：使用ELISA试剂盒测定小鼠脑组织、肝组织以及脾组织样本中TE的含量。(4)TRET基因和β-actin基因片段的克隆：提取小鼠脑组织、肝组织以及脾组织总RNA,反转录后以cDNA为模板扩增TRET基因和β-actin基因,回收扩增的各基因片段与PEZ-T质粒载体连接、转化,鉴定阳性克隆后测序。(5)TERT基因相对表达水平的检测：以各克隆的基因片段的重组质粒为标准品,通过实时荧光定量PCR仪对扩增产物和效率进行分析,优化反应条件。然后,分别以各组每个样本的cDNA为模板,通过实时荧光定量PCR检测各组小鼠TERT基因的相对表达水平。结果：模型对照组与正常对照组比较,呈现出明显的衰老的体征,体重增长缓慢(P<0.01),血清T-AOC降低极显著(P<0.01)。灌服金匮肾气丸水煎液后,衰老模型小鼠在食欲、毛色等方面得到了明显改善；末次体重(P<0.05)和增重(P<0.01)均明显增加；血清的T-AOC有显著升高(P<0.05)；能显著提高衰老模型小鼠脑组织(P<0.01)和肝组织(P<0.01)中端粒酶的含量,但是对脾组织中端粒酶的含量改变不显著(P>0.05)：能显著上调TERT基因在脑组织(P<0.01)、肝组织(P<0.01)及脾组织(P<0.01)中的表达水平。结论：金匮肾气丸能改善衰老模型小鼠的临床与生化指标,有明显的抗衰老作用；金匮肾气丸可以提高小鼠体内端粒酶的含量及TERT基因的表达水平可能是其具有抗衰老功能的一个重要原因。然而,作为复方的金匮肾气丸水煎液化学成分比较复杂,究竟是哪种或哪些成分在发挥作用,还需要进一步的研究。

全文目录

摘要  7-9
Abstract  9-11
第1章文献综述  11-21
  1.1 传统中医学对衰老的认识与探讨  11-13
    1.1.1 传统中医学对衰老的认识  11-12
    1.1.2 传统中医学对衰老机理的解释  12
    1.1.3 传统中医养生学的发展  12-13
  1.2 现代医学对衰老的认识  13-16
    1.2.1 自由基学说  13-14
    1.2.2 线粒体DNA损伤学说  14
    1.2.3 端粒学说  14-15
    1.2.4 衰老的基因学说  15
    1.2.5 大分子交联学说  15
    1.2.6 免疫学说  15-16
    1.2.7 神经内分泌学说  16
  1.3 中药抗衰老的现代研究进展  16-18
    1.3.1 抗衰老中药对寿命的影响  16-17
    1.3.2 抗衰老中药的免疫调节作用  17
    1.3.3 抗衰老中药对体内自由基的影响  17
    1.3.4 抗衰老中药对内分泌的影响  17-18
    1.3.5 抗衰老中药对衰老相关基因的影响  18
    1.3.6 抗衰老中药对端粒酶的影响  18
  1.4 金匮肾气丸的组方原理及抗衰老的研究进展  18-21
    1.4.1 金匮肾气丸的组方原理  19
    1.4.2 金匮肾气丸抗衰老的研究进展  19-21
第2章引言  21-23
  2.1 研究目的和意义  21
  2.2 技术路线  21-23
第3章材料与方法  23-35
  3.1 材料  23-25
    3.1.1 实验动物  23
    3.1.2 中药  23
    3.1.3 培养基  23
    3.1.4 主要试剂  23-24
    3.1.5 常用缓冲液与储存液的配制  24-25
    3.1.6 主要仪器设备  25
    3.1.7 质粒载体与菌种  25
  3.2 方法  25-35
    3.2.1 实验动物分组  25-26
    3.2.2 造模  26
    3.2.3 金匿肾气丸水煎液的制备  26
    3.2.4 给药  26
    3.2.5 样本采集  26
    3.2.6 模型的评价  26-27
    3.2.7 组织中端粒酶(TE)含量的测定  27-28
    3.2.8 组织样本RNA的提取  28-29
    3.2.9 引物设计与合成  29
    3.2.10 反转录合成cDNA  29-30
    3.2.11 TERT和β-actin基因片段的克隆  30-33
    3.2.12 TERT基因相对表达量测定  33-35
第4章结果与分析  35-47
  4.1 临床指标的观测  35
  4.2 血清总抗氧化能力(T-AOC)的测定  35-36
  4.3 组织中端粒酶(TE)含量的测定  36-37
  4.4 组织样本RNA的提取  37-38
  4.5 目的基因片段的RT-PCR扩增  38-39
  4.6 T-A克隆及测序  39
    4.6.1 阳性克隆的PCR筛选  39
    4.6.2 测序  39
  4.7 金匮肾气丸对TERT基因表达的影响  39-47
第5章讨论  47-51
  5.1 衰老模型小鼠的建立  47
  5.2 金匮肾气丸对衰老模型小鼠一般体征及T-AOC的影响  47-48
  5.3 金匮肾气丸对衰老模型小鼠端粒酶的影响  48-49
  5.4 展望  49-51
参考文献  51-57
附录  57-59
致谢  59-61
在校期间发表的文章  61

金匮肾气丸对衰老模型小鼠端粒酶的影响

内容摘要

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