学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

基于细胞色素P450酶的生物催化平台的建立与应用

作　者: 孙宜锋
导　师: 方渡；唐功利
学　校: 湖南中医药大学
专　业: 药物化学
关键词: 细胞色素P45O 酶生物催化平台全基因测序生物信息学分析
分类号: Q559.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 41次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

链霉菌是放线菌属革兰氏阳性细菌,广泛存在于在土壤和海洋中,可以产生一系列有重要作用的抗生素。链霉菌基因序列中经常包含细胞色素P450基因。我们希望利用基因挖掘的方法从本课题组的链霉菌菌株全序列中寻找到一些P450基因,再通过聚合酶链式反应(PCR)直接克隆得到这些P450基因,在大肠杆菌中表达获得这些新的P450酶,建立一个基于细胞色素P450氧化酶的生物催化平台,并对这些酶的活性功能进行筛选,探索它们在药物合成中的应用价值。链霉菌属菌株TP-A2060是新型抗肿瘤抗生素Yatakemycin的产生菌。我们通过生物信息学分析发掘了菌株中的P450基因,利用在线软件分析了这些P450,把它们划分到不同的CYP家族。然后利用分子生物学克隆表达方法,纯化得到了8个蛋白,还有5个可溶蛋白。基本建立了链霉菌属菌株TP-A2060细胞色素P450体系。我们对这些酶的功能进行了一些研究,目前还没有检测到相应的催化活性,进一步的研究正在进行中。

全文目录

摘要  5-6
ABSTRACT  6-7
缩写与符号  7-8
引言  8-11
  1 生物催化与药物研发  8
  2 细胞色素P450氧化酶简介  8-9
  3 通过基因挖掘的方法获得新的生物催化剂  9-10
  4 本课题的研究背景及目标  10-11
一材料与方法  11-23
  1.1 实验材料  11-19
    1.1.1 菌株  11
    1.1.2 质粒  11-13
    1.1.3 设计的引物  13-15
    1.1.4 仪器  15-16
    1.1.5 培养基  16
    1.1.6 试剂和溶液  16-19
  1.2 实验方法  19-23
    1.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化  19
    1.2.2 大肠杆菌质粒的制备  19-20
    1.2.3 蛋白的SDS-PAGE  20-23
二结果与分析  23-38
  2.1 序列分析  24-28
    2.1.1 氨基酸序列对比  24-25
    2.1.2 蛋白分析  25-28
  2.2 体系的构建  28-34
    2.2.1 质粒的构建  28-31
    2.2.2 蛋白表达与纯化  31-34
  2.3 P450酶功能的初步研究  34-38
    2.3.1 蛋白的紫外特征吸收值检测  34-35
    2.3.2 蛋白的活性初步研究  35-38
三讨论  38-39
致谢  39-40
参考文献  40-41
附录1 综述  41-51
  参考文献  48-51
附录2 发表的文章  51

基于细胞色素P450酶的生物催化平台的建立与应用

内容摘要

全文目录

相似论文