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SYBRGreenI实时荧光PCR在ABO基因分型中的应用

作　者: 李归宁
导　师: 胡丽华
学　校: 华中科技大学
专　业: 临床检验诊断
关键词: ABO血型 PCR 基因多态性实时PCR SYBR Green I 人为错配碱基
分类号: R440
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 13次
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内容摘要

目的建立一套普通PCR的ABO基因分型方法,并利用该方法筛选出常见的ABO基因型。方法收集血型正反定型一致的66份体检者的血液标本,利用普通PCR对ABO基因多态性位点261、467、802、803、1061基因型进行鉴定,测序验证其特异性。结果普通PCR筛选出8种常见ABO双倍体基因型,A101/ O01,02型7例,A102/ O01,02型8例,A101/A102型3例,B101/B101型3例,B101/ O01,02型14例,O01,02/ O01,02型18例,A101/B101型3例,A102/B101型10例,与表型鉴定结果相符。结论我们所建立的普通PCR基因分型方法是可靠的,可以作为下一步SYBR Green I实时荧光PCR方法的参照和评价标准。目的探讨SYBR Green I实时荧光PCR在血型鉴定中的应用。方法利用第一部分中我们所建立的普通PCR分型方法筛选出的ABO表型和基因型设计适用于SYBR Green I实时荧光PCR的错配引物,通过融解曲线筛选出最佳引物后对261、467、803位点进行检测,并与普通PCR比较。结果实时PCR最佳错配引物为261nor-260(A→T)、261mut-260(C→T)、467mut-466(T→G)、803nor-804(T→G)、803mut-804(T→G),利用熔解曲线可对261、467、803位点进行分型,无明显干扰。SYBR Green I实时PCR快速准确,灵敏度最高可达12.5ng。结论普通PCR虽然操作简便,但受模板质量和反应条件的影响较大,利用SYBR Green I实时荧光PCR的融解曲线分析可以准确快速鉴定血型多态性位点的基因型。

全文目录

中英文对照  5-6
中文摘要  6-7
英文摘要  7-8
1 第一部分普通PCR 基因分型  8-14
  1.1 引言  8
  1.2 材料与方法  8-10
  1.3 结果  10-13
    1.3.1 普通PCR 分型结果  10-11
    1.3.2 普通PCR 测序图谱  11-13
  1.4 讨论  13-14
2 第二部分 SYBR Green I 实时荧光PCR 基因分型  14-26
  2.1 引言  14-15
  2.2 材料与方法  15-18
  2.3 结果  18-24
    2.3.1 有效上样量的标化  18
    2.3.2 实时PCR 引物筛选  18-23
    2.3.3 实时PCR与普通PCR检测限比较  23-24
  2.4 讨论  24-26
3 结论  26-27
参考文献  27-30
综述  30-41
  参考文献  36-41
致谢  41-42
附录一 ISBT 确定的30 个血型系统  42-43
附录二专业名词解释  43-44
附录三攻读学位期间发表论文目录  44

SYBRGreenI实时荧光PCR在ABO基因分型中的应用

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