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蜜环菌发酵产物有效成分的分离鉴定与活性研究

作　者: 余晨晨
导　师: 朱显峰
学　校: 河南大学
专　业: 微生物学
关键词: 蜜环菌水溶性多糖核苷抗氧化活性抑菌活性
分类号: S567.39
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

蜜环菌是一种兼性寄生于多种木本、草本植物的野生药食两用真菌,研究发现,其具有中枢镇静、改善睡眠、增强免疫和神经调节等重要的营养价值和药理作用,相关产品制剂是治疗头痛、眩晕、神经衰弱等疾病的有效药物,蜜环菌发酵产物中富含核苷类化合物、必需氨基酸、多肽、多糖和倍半萜类化合物等多种天然活性物质,分离鉴定活性物质的组成和开展质量标准的研究,具有重要的理论意义和应用价值。本研究分析检测了蜜环菌发酵产物中的活性成分多糖、核苷物质和多肽,并利用液相色谱、气相色谱和红外光谱等方法进一步对提取到的多糖和核苷物质的基本结构进行鉴定与研究,同时考察了蜜环菌多糖的抗氧化活性和不同溶剂提取物的抗菌活性。主要的研究内容及结果如下:1.改变蜜环菌发酵的不同种类碳氮源,测定多糖含量和菌体干重,筛选出产蜜环菌多糖和菌丝体生长的最适碳氮源,得出红薯粉和豆粕的组合最适合产多糖,玉米浆和玉米粉的组合菌丝体得率最高。利用紫外、红外光谱和气相衍生化法分析了提取到水溶性多糖的基本结构信息,其结构由吡喃葡萄糖单一组成。2.通过与抗坏血酸、TBHQ的对比,对蜜环菌水溶性多糖清除羟基自由基、超氧阴离子和DPPH自由基的能力进行了系统研究。结果表明在清除率达到50 %时,多糖对·OH、·O2-和DPPH自由基的清除浓度大约为1.5 mg·mL^-1、3.5 mg·mL^-1和0.5 mg·mL^-1。三种不同的体外自由基清除体系证明了蜜环菌水溶性多糖具有较强的抗氧化活性。3.经硅胶柱层析分离到一种核苷类物质,紫外和红外光谱显示其基本结构信息,HPLC结果表明其为单一组分,而且与蜜环菌菌粉核苷色谱图中的一种物质相对应。HPLC也分析了4批不同蜜环菌菌粉中所含有的核苷化合物,初步证实发酵产物中含有7～9种核苷类物质。4.蜜环菌菌粉分别用70 %乙醇、水和石油醚进行索氏提取,对提取物开展抑菌活性实验,实验结果显示,醇提物抑制效果最好,对2种酵母菌和8种细菌均有抑菌作用,其中对白假丝酵母和葡萄假丝酵母抑菌活性最强。水提物效果微弱,石油醚则无任何作用。5.通过福林酚法测定了蜜环菌发酵产物中的多肽含量,证明用此方法检测蜜环菌产品中多肽的含量简便可行。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-12
1 绪论  12-24
  1.1 前言  12-13
  1.2 蜜环菌的概述介绍  13-18
    1.2.1 蜜环菌的生态习性和分布范围  13
    1.2.2 蜜环菌的生物学特性  13-15
    1.2.3 蜜环菌的培养与产品开发  15-18
  1.3 蜜环菌发酵产物中的活性成分及其国内外研究进展  18-21
    1.3.1 蜜环菌多糖  18-20
    1.3.2 核苷类化合物  20
    1.3.3 倍半萜类化合物  20-21
    1.3.4 其它成分  21
  1.4 蜜环菌的营养价值和药理作用  21-22
  1.5 立题的依据及意义  22-23
  1.6 本研究的主要内容  23-24
    1.6.1 蜜环菌水溶性多糖  23
    1.6.2 蜜环菌核苷类物质  23
    1.6.3 蜜环菌的抗菌作用研究  23
    1.6.4 蜜环菌多肽含量的测定  23-24
2 蜜环菌多糖的提取鉴定与培养基条件优化  24-32
  2.1 材料与设备  24-25
    2.1.1 实验原料  24
    2.1.2 仪器  24-25
    2.1.3 实验试剂  25
  2.2 实验方法  25-27
    2.2.1 蜜环菌的培养与复壮  25
    2.2.2 蜜环菌多糖的碳氮源条件优化  25-26
    2.2.3 蜜环菌水溶性多糖的提取与纯化  26
    2.2.4 蜜环菌水溶性多糖的紫外-可见分光光谱图  26
    2.2.5 多糖的GC 分析  26-27
    2.2.6 水溶性多糖的红外图谱分析  27
  2.3 结果与分析  27-31
    2.3.1 葡萄糖的标准曲线  27
    2.3.2 碳源对菌体生长和多糖产量的影响  27-28
    2.3.3 氮源对菌体生长和多糖产量的影响  28-29
    2.3.4 蜜环菌水溶性多糖的紫外-可见吸收光谱图  29
    2.3.5 多糖的组成分析  29-30
    2.3.6 水溶性多糖的红外图谱分析  30-31
  2.4 小结  31-32
3 蜜环菌水溶性多糖的抗氧化活性分析  32-38
  3.1 材料与设备  32
  3.2 实验方法  32-34
    3.2.1 蜜环菌水溶性多糖的提取与纯化  32-33
    3.2.2 多糖的得率测定  33
    3.2.3 清除羟基自由基（·OH）活性的测定  33
    3.2.4 清除超氧阴离子（O~(2－)·）能力的测定  33
    3.2.5 清除DPPH 自由基能力的测定  33-34
  3.3 结果与分析  34-36
    3.3.1 蜜环菌水溶性多糖的得率  34
    3.3.2 蜜环菌水溶性多糖对·OH 的清除作用  34
    3.3.3 蜜环菌水溶性多糖对·0~(2－)的清除作用  34-35
    3.3.4 蜜环菌水溶性多糖对DPPH 自由基的清除作用  35-36
  3.4 小结  36-38
4 蜜环菌发酵产物中的核苷类物质  38-44
  4.1 材料与设备  38
  4.2 实验方法  38-40
    4.2.1 蜜环菌发酵产物中核苷类物质的分离  38-39
    4.2.2 HPLC 的分析  39
    4.2.3 物质A 的紫外-可见光谱图  39
    4.2.4 物质A 的红外光谱图  39-40
  4.3 结果与讨论  40-42
    4.3.1 核苷类物质的HPLC 分析与检测  40
    4.3.2 物质A 的紫外和红外光谱图  40-42
  4.4 小结  42-44
5 蜜环菌提取物抑菌活性的初步研究  44-50
  5.1 材料与设备  44-45
  5.2 实验方法  45-46
    5.2.1 蜜环菌提取物的制备  45
    5.2.2 菌悬液的制备  45
    5.2.3 抑菌活性的测定  45-46
  5.3 实验结果  46-50
    5.3.1 蜜环菌提取物的抑菌活性  46-47
    5.3.2 蜜环菌醇提物的抑菌活性效果图示举例  47-50
6 蜜环菌发酵培养物中多肽含量的测定  50-54
  6.1 实验材料与设备  50
  6.2 实验方法与结果  50-54
    6.2.1 标准曲线的制备  50-51
    6.2.2 精密度实验  51
    6.2.3 重复性实验  51
    6.2.4 加样回收率实验  51-52
    6.2.5 摇瓶发酵液中多肽含量的测定  52-54
7 结论与展望  54-58
  7.1 结论  54-55
  7.2 展望  55-58
参考文献  58-64
致谢  64-65
攻读学位期间发表的学术论文目录  65-66

蜜环菌发酵产物有效成分的分离鉴定与活性研究

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