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利用人干细胞制备人鼠嵌合肝的实验研究

作　者: 周笛
导　师: 顾为望；姚刚
学　校: 新疆农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 人鼠嵌合人脐血干细胞人骨髓干细胞甲胎蛋白白蛋白
分类号: Q813
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

人类病毒性肝炎病毒具有严格的种属特异性,一直缺乏能够模拟机体感染过程的动物模型。本研究利用人类干细胞具有能分化为其他细胞的潜力并且有在肝脏增殖的特性来制备人鼠嵌合肝,以期为建立研究人类肝炎的动物模型奠定基础。第一部分:利用人脐带血干细胞制备人鼠嵌合肝。目的:利用体外移植技术,将人脐血干细胞移植到裸鼠体内,制备人鼠嵌合肝,并用乙肝病毒(HBV)感染。方法:将人脐血干细胞,经尾静脉分两次注射到裸鼠体内。分别于第7,14,21天取肝组织,进行甲胎蛋白(AFP)免疫组织化学检测,分析人肝细胞在裸鼠体内嵌合生长情况,并进行乙肝病毒感染实验,定量检测感染后小鼠血清中甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)。另取正常裸鼠做对照组。结果:实验组小鼠在第7、14、21天肝脏内AFP持续阳性表达,甲胎蛋白表达于细胞质内。乙肝病毒感染后小鼠肝脏乙肝表面抗原(HBsAg)组化显示密集成片的阳性细胞。实验组和对照组表达差异显著(P<0.05)。结论:将人脐血干细胞移植裸鼠肝脏内可以存活并分化成人肝细胞形成嵌合肝,并能被乙肝病毒感染。第二部分:利用人骨髓干细胞制备人鼠嵌合肝。目的:利用直接外科手术法,将人骨髓干细胞移植到胎鼠肝组织,制备人鼠嵌合肝。方法:人骨髓干细胞,经手术直接注射到一定日龄胎鼠肝组织,每只移植1×10~9人骨髓细胞。对出生的嵌合肝小鼠不同时相点进行血清AFP和ALB长期测定和肝组织免疫组化检测,分析人肝细胞在小鼠体内嵌合生长情况,并用携有丙肝病毒的病人血清经尾静脉注入嵌合肝小鼠体内进行感染实验。结果:2月龄、4月龄、6月龄、12月龄嵌合肝小鼠血清甲胎蛋白含量显著高于正常鼠;20d后尾静脉取血进行丙肝病毒PCR定量检测,结果表明感染阳性率可达66.67%。结论:将人骨髓干细胞移植胎鼠肝脏内能够在免疫功能正常的小鼠体内实现嵌合肝并可分化,具有人肝细胞特性可被丙肝病毒感染,存活时间能够维持达12月以上。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
第一章绪论  8-13
第二章利用人脐血干细胞制备人鼠嵌合肝的实验研究  13-23
  2.1 材料  13-14
  2.2 方法  14-18
  2.3 结果  18-20
  2.4 讨论  20-22
  2.5 小结  22-23
第三章利用人骨髓干细胞制备人鼠嵌合肝的实验研究  23-36
  3.1 材料  23-25
  3.2 方法  25-31
  3.3 结果  31-33
  3.4 讨论  33-35
  3.5 小结  35-36
第四章全文结论  36-37
参考文献  37-42
附录  42-43
致谢  43-44
作者简历  44

利用人干细胞制备人鼠嵌合肝的实验研究

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