学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

UTP对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响

作　者: 樊磊
导　师: 梅其炳；张峰
学　校: 第四军医大学
专　业: 药理学
关键词: UTP P2受体 心肌保护 缺血/再灌注
分类号: R363
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 15次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


三磷酸腺苷(ATP)作为细胞外信号分子的功能早已受到人们的关注并得到研究确认,很多类型的细胞在一定条件下均可释放ATP等核苷酸分子;ATP还是神经末梢递质,参与神经兴奋传导。由于核苷酸类受体的多样性以及物种间的差异,胞外核苷酸及其受体的生理功能还不是非常明确。胞外尿苷三磷酸(UTP)与ATP同是信号递质,参与机体生理病理过程的调节。P2受体是嘌呤与嘧啶受体(P receptors,receptors for purines and pyrimidines)的一大类,其内源性配体主要是ATP和UTP以及它们的水解产物。P2受体分为配体门控离子通道受体——P2X受体和G-蛋白偶联离子通道受体——P2Y受体,这两类受体又有诸多亚型。这些受体亚型虽然结构相似但生理功能及药理性质有很大差异,并且各种亚型之间对于同种配体的亲和力不同。与ATP相比,对于UTP也是一种细胞外信号分子的认识较晚,细胞可自分泌或者旁分泌UTP的假说最近才得到实验支持,UTP的研究成为了新的热点。细胞持续释放UTP以维持正常的生理功能,在一些病理情况下细胞也可释放UTP,例如心肌梗塞后冠脉窦血液中的UTP浓度升高.。研究发现, UTP预处理的心肌细胞对缺氧/复氧损伤的耐受性提高,在体实验表明UTP可改善大鼠心肌梗塞后的心脏功能和形态学指标。UTP预处理保护心肌的作用机制还不明确,而且,尿苷的类似物腺苷可通过触发/介导缺血预处理效应而保护心肌。本研究旨在明确介导UTP心肌预保护效应的受体以及阐明其可能的机制。本研究分为两部分:一、间接体内实验:即活体给药后的离体心脏灌流实验实验目的:探讨P2Y受体激动剂UTP对于大鼠心脏缺血/再灌注损伤(I/RI)的延迟性保护作用。实验方法:将24只SD(Sprague-Dawley)大鼠随机分为4组:对照组(静脉注射9 g/L生理盐水)、UTP组(静脉注射UTP 4.4μg/kg)、UTP+苏拉明(suramin,SRM)组(静脉注射4.4μg/kg UTP前5 min注射30μg/kg SRM)及SRM组(静脉注射30μg/kg SRM)。所有大鼠尾静脉给药24 h后,建立Langendorff离体心脏灌流模型。平衡10 min后全心停灌,25 min后复灌,持续再灌注40 min。记录心脏缺血/再灌注前后血流动力学指标,观察心肌超微结构,记录心脏表面心电图计算心律失常的发生频率,收集冠脉流出液,用全自动生化分析仪测量乳酸脱氢酶(LDH)的释放量。将剩余心肌组织用4%多聚甲醛溶液固定后包埋切片,免疫荧光染色确认成熟大鼠心脏中是否存在P2Y2受体和P2Y4受体。实验结果:复灌后心脏复跳的第5 min和25 min时,UTP组的左室发展压(LVDP)、等容收缩期左心室内压力上升/下降最大速率(±dp/dtmax)恢复率均优于对照组(P<0.01);冠脉流出液中LDH的水平明显值降低(P<0.01);复灌第5-15 min和第25-35min时的心律失常的发生频率均显著下降(P<0.01);心肌超微结构的损伤减轻。而以SRM与UTP同时作用后,UTP对心脏的保护作用则被取消。SRM组与对照组相比各项指标无明显变化。心肌组织切片的免疫荧光染色表明,成熟大鼠的心肌确实分布有P2Y2受体和P2Y4受体。结论:UTP预处理可对心脏I/RI产生延迟性拮抗作用;而P2Y受体拮抗剂SRM可取消这种作用,表明UTP对心脏的保护作用是通过P2Y受体介导的,由于UTP对P2Y2受体和P2Y4受体亲和力较高且这两种受体广泛分布于成熟大鼠的心肌,那么UTP的心肌保护作用可能是通过这两个P2Y受体的亚型介导的。二、心肌细胞实验实验目的和方法1、ATP对心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响目的:通过观察ATP预处理心肌细胞是否和UTP一样具有拮抗缺氧/复氧损伤的作用探讨介导UTP类物质心肌保护作用的P2Y受体亚型。方法:实验分组:①正常对照组;②阳性对照组即缺氧/复氧组(缺氧12h,复氧4h);③低剂量ATP预处理组(缺氧/复氧处理前24h加3μM ATP);④中剂量ATP处理组(ATP15μM );⑤高剂量ATP(ATP 50μM)。用全自动生化分析仪检测细胞复氧液中LDH的释放量。2、UTP对心肌细胞缺氧/复氧后细胞凋亡的影响目的:通过流式细胞仪检测UTP对于心肌细胞缺氧/复氧损伤引起凋亡的抑制作用。方法:实验分组:①正常对照组;②阳性对照组即缺氧/复氧组(缺氧12h,复氧4h)③UTP预处理组(缺氧/复氧处理前24h加50μM UTP);④UTP和SRM处理组(SRM 300μM,15min后加UTP50μM)。收集缺氧/复氧处理后的心肌细胞,进行流式细胞仪检测。3、Ca2+在UTP保护心肌缺氧/复氧损伤中的作用目的:明确细胞外Ca2+在P2Y受体介导的UTP心肌预保护中的作用。方法:实验分组:①正常对照组;②阳性对照组即缺氧/复氧组(缺氧12h,复氧4h);③含Ca2+培养基UTP预处理组(缺氧/复氧处理前24h加UTP 50μM);④无Ca2+培养基UTP处理组(缺氧/复氧处理前24h用无钙培养基置换原有培养基,加UTP50μM,再加入含钙培养基)。用全自动生化分析仪检测细胞复氧液中LDH的释放量。实验结果:1、ATP预处理的心肌细胞缺氧/复氧后,与对照组相比,低剂量组和中剂量组细胞培养液中LDH的释放量没有差别,高剂量组的LDH释放量增多。2、UTP预处理的心肌细胞凋亡早期百分率较对照组明显降低,而SRM与UTP合用时,凋亡早期的心肌细胞百分率升高。3、与对照组相比,无Ca2+培养基和含Ca2+培养基中的心肌细胞在缺氧/复氧处理后LDH的释放量均减少。而无Ca2+培养基组和含Ca2+培养基组之间LDH的释放量没有显著性差异。结论:1、ATP预处理不能产生心肌预保护作用,由于大鼠P2Y4受体与UTP和ATP的亲和力相当而P2Y2受体对ATP的亲和力较UTP差,那么可推断UTP的心肌保护作用主要是由P2Y2受体介导的。2、UTP预处理可通过抑制细胞的凋亡而保护心肌细胞。3、UTP作用于无Ca2+培养基中的心肌细胞后细胞抗缺氧/复氧损伤的能力并不降低说明该效应不依赖胞外Ca2+的内流。

全文目录


缩略语表  5-6
中文摘要  6-10
英文摘要  10-16
前言  16-18
文献回顾  18-33
正文  33-55
  实验一 UTP对大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的作用  33-45
    1 材料  33-34
    2 方法  34-36
    3 结果  36-42
    4 讨论  42-44
    5 小结  44-45
  实验二心肌细胞实验  45-55
    1 材料  45-46
    2 方法  46-48
    3. 结果  48-52
    4 讨论  52-55
小结  55-56
参考文献  56-67
个人简介  67-68
致谢  68

相似论文

  1. 骨髓间充质干细胞预移植1周对大鼠心肌缺血再灌损伤的修复作用,R542.22
  2. 腺苷介导的侧脑室吗啡预处理对缺血后心肌保护作用,R542.22
  3. HIF-1α在犬体外循环缺血再灌注心肌胰岛素抵抗中的表达及意义,R654.1
  4. 万胜化风丹的急性肝肾毒性及对脑缺血再灌注损伤的保护作用,R285.5
  5. Nrf2-ARE通路在离体鼠心缺血/吡那地尔后处理中作用的研究,R96
  6. 乙醛脱氢酶2在法舒地尔心肌保护中的作用探讨,R54
  7. PCI术前强化他汀治疗对ACS患者心肌保护作用机制探讨,R541.4
  8. 缺血—再灌注损伤小鼠肾脏中解偶联蛋白2的表达及其意义,R587.1
  9. 内质网应激预处理提高肾组织对缺血再灌注损伤耐受性的作用及机制,R692.5
  10. 全脑缺血再灌注大鼠海马CA1区Ngb与Caspase-3的相关性研究,R741
  11. 阿托伐他汀对大鼠局灶性脑缺血再灌注的脑保护作用及对脑MMP-9、TIMP-1表达的影响,R743.33
  12. 丁苯酞预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用,R743.33
  13. 丹星通络汤对大鼠脑缺血再灌注损伤TNF-α、NF-κB表达的影响,R285.5
  14. 表没食子儿茶素没食子酸酯减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的机制,R285.5
  15. 缺血再灌注期间大鼠心肌细胞和成纤维细胞单羧酸转运蛋白（MCT1）表达水平的研究,R614
  16. 一氧化碳释放分子CORM-2对小鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用研究,R699.2
  17. 纤维介素在脑急性缺血再灌注微循环障碍中的作用研究,R743
  18. 大鼠全脑缺血再灌注对脑组织紧密连接蛋白occludin的影响,R741
  19. 异喹啉类生物碱SIPI409抗实验性心律失常作用的研究,R965
  20. 利多卡因对幼鼠小肠缺血—再灌注致肾损伤的保护作用,R965
  21. 丹参与维拉帕米联合应用对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用,R285

中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 病理学 > 病理生理学
© 2012 www.xueweilunwen.com