学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

山东省禽源大肠杆菌血清型鉴定及喹诺酮类药物耐药性研究

作　者: 李莎莎
导　师: 姜世金
学　校: 山东农业大学
专　业: 预防兽医
关键词: 大肠杆菌血清型喹诺酮类药物耐药性 MIC gyrA基因 gyrB基因 parC基因 parE基因
分类号: S852.61
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 152次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载

内容摘要

在临床兽医上,大肠杆菌病造成的危害十分严重,特别是禽大肠杆菌病,由于其临床症状复杂、病理特征多样,一直是困扰养殖业发展的常见病。近年来,集约化养殖使主要疾病得到基本控制后,大肠杆菌病呈明显上升趋势,已成为养殖业主要细菌性疾病之一。1、2003-2009年山东省禽源大肠杆菌血清型鉴定2003年以来,自山东省不同地区的规模化养鸡场和养鸭场具有典型大肠杆菌病临床症状和病理变化的病禽中分离鉴定出214株大肠杆菌,应用微量平板凝集试验共鉴定出200株分离菌的O抗原血清型,分别属于14个血清型,其中O78、O88、O2、O35和O18为主要优势血清型,占总分离菌株的82.7%,而O3血清型在我国禽类中还未见报道过。2、禽源大肠杆菌普通药敏试验及最低抑菌浓度(MIC)测定采用WHO推荐的纸片法对分离鉴定的214株大肠杆菌进行6种喹诺酮类药物敏感性实验。结果表明:分离菌存在广泛的耐药性,49.5%的菌株对6种药物均有耐药性。6种药物中最为敏感的是左氧氟沙星,耐药率为71.5%,而培氟沙星最不敏感,耐药率为92.1%,环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星及洛美沙星的耐药率分别为为77.1%、79.0%、81.8%和88.8%。鸭源大肠杆菌耐药率(60.4%)要明显高于鸡源大肠杆菌的耐药率(41.5%)。从2003年到2009年大肠杆菌耐药率逐年上升,而且不同地区敏感药物差异较大,各地区均有敏感药物和耐受药物。采用CLSI推荐的微量肉汤稀释法对214株大肠杆菌进行了乳酸环丙沙星和乳酸诺氟沙星的最低抑菌浓度(MIC)的测定,结果表明乳酸环丙沙星耐药率为87.4%,乳酸诺氟沙星耐药率为89.3%。3、喹诺酮类耐药基因克隆测序及规律的分析根据乳酸诺氟沙星和乳酸环丙沙星这两种药物的MIC,选取不同抑菌浓度的47株大肠杆菌,对其基因组上耐药基因gyrA、gyrB、parC和parE进行了PCR扩增及测序分析。与GenBank公布的序列进行比较,发现氨基酸差异:(1)gyrA基因83位Ser突变为Leu,87位Asp突变为Asn;(2)gyrB基因491基因Ser突变为Asn,但没发现突变规律;(3)parC80位Ser突变为Ile,84位点Glu→Gly;(4)parE突变较少见,仅在458位Ser突变为Ala和Thr。gyrA基因突变是对喹诺酮类药物耐药的主要原因,是首要靶位点;parC基因突变可能在对喹诺酮抗菌药物高水平耐药的形成中起辅助性作用,是第二靶位点;gyrB基因单突变对喹诺酮类药物高水平耐药性的形成并无明显的相关性;parE基因突变较少见,且与喹诺酮类药物的耐药性无明显相关性。

全文目录

符号及缩略词  8-9
中文摘要  9-11
ABSTRACT  11-13
1 引言  13-33
  1.1 病原学  14-19
    1.1.1 形态及结构  14
    1.1.2 培养特性  14
    1.1.3 生化特性  14-15
    1.1.4 抵抗力  15
    1.1.5 抗原结构及血清学特性  15-17
    1.1.6 致病性  17-19
  1.2 流行病学  19-20
    1.2.1 传染源  19
    1.2.2 传播途径  19-20
    1.2.3 易感家禽  20
  1.3 临床症状和病理学变化  20-23
    1.3.1 急性败血症  20-21
    1.3.2 肝周炎  21
    1.3.3 气囊炎  21
    1.3.4 纤维素性心包炎  21
    1.3.5 卵黄性腹膜炎  21
    1.3.6 大肠杆菌性肉芽肿  21-22
    1.3.7 关节炎  22
    1.3.8 全眼球炎  22
    1.3.9 鸡胚与幼胚早期死亡  22
    1.3.10 脑膜炎  22
    1.3.11 蜂窝炎  22
    1.3.12 鸭大肠杆菌性败血病  22-23
  1.4 诊断  23-24
    1.4.1 病原菌分离和鉴定  23
    1.4.2 鉴别诊断  23-24
  1.5 防治  24-25
    1.5.1 预防  24
    1.5.2 治疗  24-25
  1.6 细菌的耐药性  25-29
    1.6.1 FQs 药物耐药情况  26
    1.6.2 FQs 药物抗菌机理  26-29
  1.7 关于耐药性研究的意义  29-30
  1.8 关于耐药性的克服  30-33
2 材料与方法  33-45
  2.1 禽源大肠杆菌的分离鉴定及血清型检测  33-34
    2.1.1 试验菌株和药敏质控菌株  33
    2.1.2 培养基及试剂  33
    2.1.3 主要仪器  33
    2.1.4 大肠杆菌的分离  33
    2.1.5 生化试验鉴定  33-34
    2.1.6 血清型鉴定  34
  2.2 大肠杆菌喹诺酮类药物敏感试验及体外最低抑菌浓度（MIC）测定  34-36
    2.2.1 供试药物及培养基  34
    2.2.2 普通药敏纸片试验  34-35
    2.2.3 体外最低抑菌浓度（MIC）测定  35-36
  2.3 喹诺酮类药物耐药基因GYRA、GYRB、PARC 和PARE 的克隆测序与序列分析  36-45
    2.3.1 分子生物学试剂  36-37
    2.3.2 电泳缓冲液  37
    2.3.3 琼脂糖凝胶的配制  37
    2.3.4 实验仪器设备  37
    2.3.5 试验菌株的选择  37-39
    2.3.6 引物设计与合成  39-40
    2.3.7 PCR 反应  40-41
    2.3.8 PCR 产物的琼脂糖凝胶电泳  41
    2.3.9 PCR 产物的回收  41-42
    2.3.10 回收目的片段的连接及转化  42-43
    2.3.11 重组质粒DNA 的提取  43-44
    2.3.12 重组质粒的酶切鉴定  44
    2.3.13 阳性克隆序列测定  44-45
3 结果  45-58
  3.1 山东地区禽源大肠杆菌的分离鉴定及血清性的鉴定  45-49
    3.1.1 大肠杆菌的分离及初步鉴定  45-46
    3.1.2 生化试验结果  46-48
    3.1.3 血清型鉴定结果  48-49
  3.2 大肠杆菌喹诺酮类药物敏感试验及体外最低抑菌浓度（MIC）测定  49-54
    3.2.1 普通药敏纸片试验结果  49-51
    3.2.2 多重耐药结果  51
    3.2.3 不同年份的大肠杆菌的耐药情况  51-52
    3.2.4 大肠杆菌活菌计数结果  52-53
    3.2.5 体外最低抑菌浓度（MIC）测定  53-54
  3.3 喹诺酮类药物耐药基因GYRA、GYRB、PARC 和PARE 的克隆测序与序列分析结果  54-58
    3.3.1 菌株PCR 扩增gyrA、gyrB、parC 和parE 基因结果  54-55
    3.3.2 重组质粒鉴定结果  55-57
    3.3.3 测序结果分析  57-58
4 讨论  58-68
  4.1 禽源大肠杆菌分离鉴定及血清学检测  58-64
    4.1.1 禽源大肠杆菌分离鉴定  58-63
    4.1.2 禽源大肠杆菌O 抗原血清型鉴定  63-64
  4.2 大肠杆菌喹诺酮类药物敏感试验及体外最低抑菌浓度（MIC）测定  64-66
  4.3 喹诺酮类药物耐药基因GYRA、GYRB、PARC 和PARE 的克隆测序与序列分析  66-68
    4.3.1 大肠杆菌gyrA 和parC 基因突变分析  66-67
    4.3.2 E.coli gyrB 和parE 基因突变分析  67
    4.3.3 喹诺酮类耐药基因gyrA、gyrB、parC 和parE 之间的关系  67-68
5 结论  68-69
参考文献  69-79
致谢  79-80
攻读硕士期间发表论文情况  80

山东省禽源大肠杆菌血清型鉴定及喹诺酮类药物耐药性研究

内容摘要

全文目录

相似论文