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菜籽肽的生物活性与构象研究

作　者: 汪一帆
导　师: 黄金海；薛照辉
学　校: 天津大学
专　业: 食品科学
关键词: 分离纯化生物活性构象液质联用拉曼光谱红外光谱分子模拟
分类号: Q946.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

人类摄食的蛋白质经消化道酶作用后,主要是以低聚肽形式被吸收,某些低聚肽不仅能提供人体生长、发育所需的营养物质,还具有防病治病、调节人体生理机能的功效。菜籽肽的氨基酸含量多且平衡良好,并含有多种生物活性。菜籽肽已成为目前植物源活性肽研究领域的新热点。本研究通过柱层析系统、液质联用、傅立叶-拉曼光谱、红外光谱、分子模拟等近代最新技术,系统地研究了菜籽肽的理化性质、分离纯化、生物活性及空间构象,结果如下:采用Alcalase和Flavourzyme分步水解得到菜籽肽并对其理化性质进行研究,通过葡聚糖凝胶层析获得了RSP-1、RSP-2、RSP-3和RSP-4共4个组分。对菜籽肽各级分的清除自由基作用和抑制血管紧张素转化酶(ACE)作用表明,RSP-4的清除ABTS自由基作用(TEAC值=0.24)和抑制ACE作用(IC50=0.19 mg/mL)最强,而其清除DPPH作用(IC50=0.18 mg/mL)则仅低于RSP-1(IC50=0.125 mg/mL)和RSP-2(IC50=0.125 mg/mL)。采用液质联用、傅立叶-拉曼光谱、红外光谱、分子模拟等技术对RSP-4构象进行了深入研究与分析。通过液质联用技术确定RSP-4的分子量为977Da,结合数据库检索可推测其氨基酸序列为PFDSYFVC。拉曼光谱和红外光谱解析不但验证了质谱所得的氨基酸组成信息,拉曼光谱更进一步表明其二级空间结构为β-转角。通过分子模拟技术对RSP-4三维空间结构进行预测。按照RSP-4序列进行多肽合成,并对其生物活性进行进一步研究。该研究对菜籽肽的生物活性和构象进行了系统深入的研究,其结果为天然活性肽在生物医药中的应用提供了科学依据和理论基础,同时为植物源活性肽的开发与应用提供了新的思路、借鉴。

全文目录

摘要  3-4
ABSTRACT  4-9
第一章文献综述  9-30
  1.1 植物源活性肽的研究进展  9-19
    1.1.1 植物源活性肽的研究概况  9-10
    1.1.2 植物源活性肽的分离纯化  10-11
    1.1.3 植物源活性肽的理化性质  11-12
    1.1.4 植物源活性肽的活性  12-14
    1.1.5 植物源活性肽的应用  14-15
    1.1.6 几种常见的植物源活性肽  15-19
  1.2 菜籽肽的研究进展  19-21
    1.2.1 菜籽肽的营养价值  19
    1.2.2 菜籽肽的构效关系  19-21
  1.3 研究内容和研究方法  21-27
    1.3.1 分离纯化  21-23
    1.3.2 测定构像  23-26
    1.3.3 人工合成肽  26
    1.3.4 分子模拟  26-27
  1.4 研究与展望  27-28
  1.5 本研究的目的和内容  28-30
第二章菜籽肽的制备及分离纯化  30-37
  2.1 实验材料  31
    2.1.1 实验仪器  31
    2.1.2 主要试剂  31
  2.2 实验方法  31-33
    2.2.1 菜籽肽的制备  31-32
    2.2.2 菜籽肽的理化性质  32-33
    2.2.3 菜籽肽的分离纯化  33
  2.3 结果与分析  33-34
    2.3.1 菜籽肽的理化性质  33
    2.3.2 菜籽肽的分离纯化  33-34
  2.4 讨论  34-36
    2.4.1 菜籽肽的理化性质  34-35
    2.4.2 菜籽肽的分离纯化  35-36
  2.5 小结  36-37
第三章菜籽肽各级分的生物活性  37-49
  3.1 实验材料  37-38
    3.1.1 实验仪器  37-38
    3.1.2 主要试剂  38
  3.2 实验方法  38-41
    3.2.1 菜籽肽各级分的清除ABTS 自由基作用  38-39
    3.2.2 清除ABTS 自由基的协同实验  39
    3.2.3 菜籽肽各级分的清除DPPH 自由基作用  39-40
    3.2.4 清除DPPH 自由基的协同实验  40
    3.2.5 菜籽肽各级分的抑制ACE 作用  40-41
  3.3 结果与分析  41-46
    3.3.1 菜籽肽各级分的清除ABTS 自由基作用  41-42
    3.3.2 清除ABTS 自由基作用的协同实验  42-43
    3.3.3 菜籽肽各级分的清除DPPH 自由基作用  43-45
    3.3.4 清除DPPH 自由基作用的协同实验  45
    3.3.5 菜籽肽各级分的抑制ACE 作用  45-46
  3.4 讨论  46-48
    3.4.1 菜籽肽清除自由基作用  46-47
    3.4.2 清除自由基的协同作用  47-48
    3.4.3 菜籽肽各级分的抑制ACE 作用  48
  3.5 小结  48-49
第四章菜籽肽RSP-4 的构象  49-67
  4.1 实验材料  50-51
    4.1.1 实验仪器  50
    4.1.2 主要试剂  50-51
  4.2 实验方法  51-53
    4.2.1 质谱  51
    4.2.2 傅立叶-拉曼光谱  51
    4.2.3 红外光谱  51
    4.2.4 分子模拟  51-53
    4.2.5 合成肽的活性实验  53
  4.3 结果与分析  53-65
    4.3.1 RSP-4 的质谱分析  53-57
    4.3.2 RSP-4 的傅立叶-拉曼光谱分析  57-60
    4.3.3 RSP-4 的红外光谱分析  60-62
    4.3.4 RSP-4 的分子模拟  62-63
    4.3.5 合成肽的活性实验  63-65
  4.4 讨论  65-66
  4.5 小结  66-67
第五章结论  67-68
参考文献  68-76
发表论文和科研情况说明  76-77
附录1：分子模拟参数  77-87
致谢  87

菜籽肽的生物活性与构象研究

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