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1-脱氧野尻霉素（DNJ）生物合成影响因素和富含DNJ分离物对HeLa肿瘤细胞抑制作用的研究

作　者: 娄德帅
导　师: 桂仲争
学　校: 江苏科技大学
专　业: 特种经济动物饲养
关键词: 蚕桑 1-脱氧野尻霉素高效液相色谱生物合成因素抗肿瘤
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 62次
引　用: 1次
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内容摘要

1-脱氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin,DNJ)是一种多羟基哌啶生物碱。研究表明DNJ具有通过抑制α-葡萄糖苷酶活性,进而抑制餐后血糖升高、抗病毒、抗肿瘤等多种生物学活性。自然界中蚕桑资源中的DNJ含量最为丰富。为了更好地开发利用蚕桑资源中的DNJ,本研究比较分析了四种常用的DNJ提取方法的提取效率、桑树中DNJ的含量分布、影响DNJ生物合成的环境因素,初步分离纯化了家蚕中的DNJ并探讨了其抗肿瘤的活性。以期能为蚕桑资源中DNJ的大规模利用提供基础数据和理论指导。本文比较了已报道的DNJ四种提取方法:稀酸浸渍法、乙醇水溶液浸渍法、煎煮法、微波辅助法的提取效率,结果显示稀酸浸渍法的提取效率最高,其他三种提取方法的提取效率仅为其60%-70%,此结果的得出为DNJ高效提取工艺的建立提供了重要的理论基础。利用稀酸浸渍法提取、柱前衍生化RP-HPLC-FD法检测分析桑树资源中DNJ的分布规律,结果表明桑树不同组织部位中DNJ含量存在差异:上位叶中DNJ含量介于0.3%-0.4%,侧根介于0.2%-0.3%,中位叶介于0.1%-0.2%,下位叶低于0.1%。这表明桑树幼嫩的叶片是DNJ良好的天然储存库。本文对不同地理来源的湖桑32号品种中DNJ含量进行了测定,结果表明生长于不同地理位置的桑树中DNJ含量存在较大差异,所测六个样品中含量介于0.06%-0.21%之间。六个不同植桑地除了纬度不同以外,土壤中矿质元素含量、pH值等指标也存在差异。另外,结果显示每天6-10时和18时为DNJ合成高峰期,以上结果表明DNJ的生物合成除了与桑树自身代谢有关以外,与地理位置、土壤理化性质、气象环境等诸多因素有密切相关。干燥和粉碎是提取全蚕粉DNJ两个重要的前处理过程。对比试验表明:家蚕经冷冻干燥的效果优于热风烘干;物料粒度越小越有利于DNJ的提取;利用稀酸浸渍法提取、离子交换树脂初步纯化所得全蚕粉分离物(SCS)中DNJ含量达到1.08%;通过MTT法检测抗肿瘤活性,结果表明SCS具有显著的抗肿瘤活性,SCS对肿瘤细胞的抑制效果存在显著的剂量-效应依赖性,当SCS剂量为40mg/mL时,HeLa肿瘤细胞的增殖作用几乎完全被抑制。

全文目录

目录  2-4
CONTENTS  4-6
第1章绪论  6-16
  1.1 生物碱概述  6-7
    1.1.1 生物碱  6-7
    1.1.2 哌啶类生物碱  7
  1.2 1-脱氧野尻霉素研究进展  7-12
    1.2.1 1-脱氧野尻霉素  7
    1.2.2 1-脱氧野尻霉素的生物学活性  7-10
    1.2.3 1-脱氧野尻霉素的提取、分离纯化方法  10-11
    1.2.4 1-脱氧野尻霉素的检测方法  11-12
  1.3 蚕桑资源中1-脱氧野尻霉素的含量分析及其应用研究  12-14
  1.4 展望  14-16
第2章 1-脱氧野尻霉素（DNJ）的提取及其在桑树中的分布  16-24
  2.1 前言  16
  2.2 试验材料与方法  16-18
    2.2.1 试验材料与仪器  16-17
    2.2.2 方法  17-18
  2.3 结果  18-21
    2.3.1 DNJ 高效液相色谱图及标准曲线  18-21
    2.3.2 不同提取方法的比较  21
    2.3.3 桑树资源中DNJ 的含量分析  21
  2.4 分析与讨论  21-22
  2.5 结论  22-24
第3章影响桑树DNJ 生物合成的主要环境因素  24-29
  3.1 前言  24
  3.2 试验材料与方法  24-25
    3.2.1 试验材料与仪器  24-25
    3.2.2 方法  25
  3.3 结果  25-27
    3.3.1 气象条件对DNJ 合成的影响  25-26
    3.3.2 土壤性质对DNJ 合成的影响  26-27
  3.4 分析与讨论  27-28
  3.5 结论  28-29
第4章不同前处理方法对全蚕粉中DNJ 提取效率的影响  29-35
  4.1 前言  29
  4.2 试验材料与方法  29-31
    4.2.1 试验材料与仪器  29-30
    4.2.2 方法  30-31
  4.3 结果  31-33
    4.3.1 高效液相色谱图及标准曲线  31-33
    4.3.2 不同前处理对DNJ 提取效率的影响  33
  4.4 分析与讨论  33-34
  4.5 结论  34-35
第5章含DNJ 的全蚕粉分离物（SCS）对HeLa 肿瘤细胞的抑制作用  35-42
  5.1 前言  35
  5.2 试验材料与方法  35-37
    5.2.1 试验材料与仪器  35-36
    5.2.2 方法  36-37
  5.3 结果  37-40
    5.3.1 SCS 中DNJ 的含量分析  37
    5.3.2 SCS 对HeLa 肿瘤细胞的抑制作用  37-40
  5.4 分析与讨论  40-41
  5.5 结论  41-42
结论  42-43
参考文献  43-49
攻读学位期间发表的学术论文  49-50
致谢  50-51
论文摘要  51-55
  中文摘要  52-53
  Abstract  53-55

1-脱氧野尻霉素（DNJ）生物合成影响因素和富含DNJ分离物对HeLa肿瘤细胞抑制作用的研究

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