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Ras信号通路对HeLa细胞增殖及FBW7、cyclin E表达的影响

作　者: 孙迪
导　师: 沈宜
学　校: 重庆医科大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: Ras信号通路 HeLa细胞 FBW7 cyclin E
分类号: R737.33
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的:研究Ras及其下游PI3K和MAPK信号通路对人类宫颈癌细胞株HeLa细胞增殖及细胞周期素E(cyclin E)表达的影响。在此基础上,进一步探讨介导cyclin E泛素化降解的抑癌蛋白F-盒和含蛋白7的WD重复结构域(FBW7)在HeLa细胞中的表达特点,并观察调控cyclin E表达的Ras下游信号通路对FBW7表达的影响。方法:1.以宫颈癌细胞株HeLa细胞为研究对象,观察Ras信号通路对HeLa细胞增殖、细胞周期分布及cyclin E表达的影响:不同浓度Ras信号通路阻断剂FTI-277处理HeLa细胞,噻唑兰比色(MTT)法检测FTI-277对HeLa细胞的增殖抑制率;流式细胞术(FCM)检测FTI-277对HeLa细胞细胞周期分布的影响;RT-PCR和Western blot检测FTI-277对HeLa细胞cyclin E的mRNA和蛋白水平表达的影响。2.观察Ras下游PI3K和MAPK信号通路对HeLa细胞增殖及cyclin E表达的影响:不同浓度PI3K信号通路阻断剂LY-294002和MAPK信号通路阻断剂UO-126分别处理HeLa细胞,MTT法分别检测两者对HeLa细胞的增殖抑制率;RT-PCR和Western blot分别检测两者对HeLa细胞cyclin E的mRNA和蛋白水平表达的影响。3.观察Ras下游调控cyclin E表达的MAPK信号通路对HeLa细胞FBW7表达的影响:RT-PCR和Western blot检测UO-126对HeLa细胞FBW7的mRNA和蛋白水平表达的影响;免疫荧光法观察HeLa细胞FBW7的分布及UO-126对HeLa细胞FBW7表达的影响。结果:1. MTT实验显示,Ras信号通路阻断剂FTI-277具有抑制HeLa细胞增殖的作用,且具有时效量效依赖性。结果显示10μmol/L的FTI-277药物浓度处理组线性相关性最好,因此,在后续的实验中我们采用10μmol/L的FTI-277作为干扰因素,探讨FTI-277对HeLa细胞周期及cyclin E表达的影响。FCM检测细胞周期结果显示,FTI-277作用后细胞周期滞留于G1/S期,且具有时间依赖性。RT-PCR和Western blot检测结果显示FTI-277作用后,HeLa细胞cyclin E mRNA水平无明显改变,cyclin E蛋白表达水平减弱。2.PI3K信号通路阻断剂LY-294002和MAPK信号通路阻断剂UO-126均显示出抑制HeLa细胞增殖的作用,10μmol/L的LY-294002药物浓度处理组和10μmol/L的UO-126药物浓度处理组分别显示出最好的线性相关性,因此,实验中采用10μmol/L的LY-294002和10μmol/L的UO-126处理HeLa细胞,观察不同时间梯度下cyclin E表达的变化。LY-294002对cyclin E的蛋白表达无明显影响,相对之下,UO-126能下调cyclin E的蛋白表达。3. RT-PCR和Western blot检测结果显示UO-126作用后,HeLa细胞FBW7 mRNA及蛋白表达均增多。免疫荧光结果显示,FBW7在HeLa细胞的细胞质和细胞核中有表达,细胞核部位表达较多。UO-126处理HeLa细胞后FBW7阳性表达增强,并具有时间依赖性。结论:1. HeLa细胞的异常增殖与Ras信号通路的激活有关,阻断Ras信号通路激活可以减慢HeLa细胞周期G1/S期的进程并下调cyclin E蛋白的表达。Ras-MAPK信号通路而不是Ras-PI3K信号通路在HeLa细胞cyclin E蛋白的表达调控中发挥重要作用。2. HeLa细胞中泛素化降解cyclin E的抑癌蛋白FBW7表达也与Ras-MAPK信号通路有关。FBW7位于Ras-MAPK信号通路的下游。

全文目录


英汉缩略语名词对照  5-7
中文摘要  7-10
英文摘要  10-14
前言  14-16
第一部分 Ras 信号通路对HeLa 细胞增殖及cyclin E 表达的影响  16-39
  1. 材料和方法  16-27
  2. 结果  27-35
  3. 讨论  35-39
第二部分Ras-MAPK 信号通路对HeLa 细胞FBW7 表达的影响  39-48
  1. 材料和方法  39-42
  2. 结果  42-45
  3. 讨论  45-48
全文总结  48-49
参考文献  49-56
附图  56-65
文献综述  65-76
致谢  76-77
攻读硕士期间发表的论文  77

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 女性生殖器肿瘤 > 子宫肿瘤
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