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siRNA抑制cortactin基因表达对喉癌Hep-2细胞增殖和侵袭的影响

作　者: 谭桂煌
导　师: 谢海龙；甘润良
学　校: 南华大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: cortactin 喉癌 Hep-2细胞 siRNA 侵袭
分类号: R739.65
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 33次
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内容摘要

背景与目的:皮层肌动蛋白结合蛋白cortactin (cortical actin-binding protein)参与细胞骨架系统的调控、细胞外信号转导以及细胞黏附等过程,研究表明cortactin与肿瘤的侵袭和转移有关。然而,cortactin在喉癌中的重要作用还没有被详细的阐明。本实验探讨siRNA(small interfering RNA)抑制cortactin基因表达对喉癌Hep-2细胞系体外增殖和侵袭的影响。方法:利用基因重组技术构建针对cortactin基因的小干扰RNA真核表达载体pSilencer3.1-H1neo-cortactin;用DNA测序法鉴定重组质粒;用脂质体转染技术将重组质粒转染Hep-2细胞,同时以转空载体组和空白组作为对照(三组细胞分别命名为pcortactin-siRNA/Hep-2,pSilencer3.1/Hep-2,Hep-2),G418筛选出阳性细胞克隆;应用Western blot及免疫细胞化学方法分别检测cortactin在Hep-2中的siRNA干扰效率及定位;MTT和平皿克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期分布情况;Transwell体外迁移、侵袭实验检测细胞迁移侵袭能力。结果: DNA测序分析表明针对cortactin基因的重组真核表达载体pSilencer3.1-H1neo-cortactin构建成功。免疫细胞化学方法显示cortactin在Hep-2细胞胞浆中呈弥漫性表达,Western blot显示成功构建cortactin表达下调的稳转喉癌细胞系pcortactin- siRNA/Hep-2。与空白组Hep-2细胞比较, pcortactin-siRNA/Hep-2的cortactin含量为11.22%(P<0.01);细胞生长速度明显减慢(P<0.05);克隆形成率降低为21.47% (P<0.01);细胞中S期细胞百分比明显降低(P<0.05);迁移、侵袭能力显著降低(P<0.01)。结论:1.成功建立cortactin表达下调的稳定转染喉癌细胞系pcortactin-siRNA/Hep-2。2.Cortactin表达下调能抑制喉癌Hep-2细胞的增殖和侵袭。

全文目录

中文摘要  4-5
英文摘要  5-7
正文  7-34
  前言  7-9
  实验材料  9-12
  技术路线  12-13
  实验方法  13-22
  实验结果  22-29
  讨论  29-33
  结论  33-34
参考文献  34-37
附录  37-38
文献综述  38-50
硕士期间撰写的论文  50-51
致谢  51

siRNA抑制cortactin基因表达对喉癌Hep-2细胞增殖和侵袭的影响

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