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环磷酰胺对大鼠脑I/R损伤的保护作用及海马GFAP表达的影响

作 者: 林泽喜
导 师: 龙双涟
学 校: 南华大学
专 业: 组织胚胎学
关键词: 脑缺血再灌注损伤 胶原纤维酸性蛋白 神经元 肿瘤坏死因子-α 脑红蛋白 炎症级联反应 环磷酰胺 星形胶质细胞
分类号: R965
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
下 载: 31次
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内容摘要


目的:通过研究环磷酰胺对局灶性脑缺血再灌注损伤后大鼠海马区胶原纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)以及皮层和海马区脑红蛋白(Neuroglobin,Ngb)的表达和神经元(Neuro)存活情况的影响,探讨环磷酰胺在缺血再灌注损伤后对脑的保护作用及可能的作用机制。方法:健康成年SD雄性大鼠72只,体重180~220g之间,南华大学实验动物部提供。随机分成四组,即正常对照组(正常组)、假手术组、模型对照组(模型组)和环磷酰胺处理组(处理组),每组各18只,后三组(假手术组、模型组和处理组)分别再按24小时、72小时及5天三个时间点随机分组,每组6只。用Longa线栓法[1]经改良建立SD大鼠局灶性脑缺血模型。处理组缺血后1小时给予环磷酰胺腹腔注射,模型组和假手术组均于术后1小时以等量生理盐水腹腔注射;处理组和模型组均于缺血后2小时拔线形成再灌注,每组均按各自的时间点(24小时、72小时和5天)分别观察,并做Longa法神经功能评分,随后处死取脑,正常组直接处死取脑。脑组织经石蜡包埋、切片后,行HE染色、Nissl染色以及应用免疫组织化学技术检测各组脑组织不同时段以及正常脑组织中的GFAP、TNF-α和Ngb,光镜观察组织学变化,计算缺血侧大脑皮层神经元和海马区GFAP、TNF-α和Ngb阳性反应细胞。数据采用SPSS13.0统计软件进行多个样本均数比较的配伍设计双因素方差分析,以P<0.05或P<0.01为显著性检验水准。结果:1.神经功能缺损评分正常组和假手术组均为0分;治疗组神经功能评分明显轻于模型组,两组在24小时、72小时、5天三个不同时间点比较均有显著性差异(P<0.05)。2.HE染色正常组和假手术组皮层神经细胞形态正常,数量多,排列整齐。模型组神经细胞稀疏,细胞间隙增大,并可见大量细胞变性坏死,表现为胞体皱缩,核固缩,核仁消失;处理组神经细胞存活数量明显增多,损伤程度减轻。3.Nissl染色正常组及假手术组皮层神经细胞膜呈蓝紫色,胞核呈饱满的淡蓝色,可见很多紫蓝色的尼氏体,细胞排列整齐;模型组大鼠尼氏体溶解消失或很少,环磷酰胺治疗后尼氏体明显增多。4.脑组织海马区GFAP的表达模型组24小时后即可见GFAP阳性细胞少量分布于海马区,72小时后增多,而5天后达高峰。经过环磷酰胺处理后,海马区GFAP表达减少,分别与模型组的同一时间点(24小时、72小时、5天)比较,有统计学意义(P<0.05)。而假手术组和正常组海马区未见GFAP阳性细胞表达。5.脑组织海马区TNF-α的表达模型组与处理组各时间段均可见到TNF-α的表达,在缺血后24小时最高,随时间增长逐渐减少,正常组或者假手术组均未见到TNF-α的表达。处理组与模型组比较,24小时及72小时后均有统计学意义(分别为P<0.01和P<0.05),5天后两组间比较无统计学意义。6.脑组织中Ngb的表达正常组与假手术组中均可见到大鼠脑组织有Ngb的表达,两组间比较无统计学意义;缺血再灌注后Ngb的表达明显增加,与正常组或假手术组比较,有统计学意义(P<0.05);而环磷酰胺治疗后Ngb的表达进一步增加,与正常组或假手术组比较,有统计学意义(P<0.01),与模型组比较,有统计学意义(P<0.05)。结论1在脑缺血再灌注损伤模型大鼠中,环磷酰胺可减轻神经元变性坏死、抑制星形胶质细胞的活化,使GFAP表达减少,并可抑制TNF-α的表达,增加Ngb的表达,从而减轻脑缺血再灌注损伤,发挥脑保护作用。2环磷酰胺的神经保护作用机制可能与脑缺血再灌注损伤后抑制星形胶质细胞活化、抑制TNF-α表达、增加Ngb、进而减轻脑缺血再灌注损伤后的炎症级联反应有关。

全文目录


主要英文缩略索引(Main English abbreviation index)  4-5
中文摘要(Chinese abstract)  5-8
英文摘要(English abstract)  8-12
论文正文(TEXT)  12-49
   前言(Introduction)  12-14
   材料和方法(Materials and Methods)  14-20
   结果(Results)  20-36
   讨论(Discussion)  36-42
   结论(Conclusions)  42-43
   参考文献(References)  43-49
综述(Review)  49-57
   综述参考文献(References of the Review)  55-57
攻读硕士学位期间发表的论文(Articles Published in Studing for Master's Degree)  57-58
致谢(Acknwledgements)  58

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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药理学 > 实验药理学
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