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泄浊解毒方对溃疡性结肠炎大鼠IL-8、IκB-α及TLR4的影响

作　者: 荣英蕊
导　师: 刘建平
学　校: 河北医科大学
专　业: 中医内科学
关键词: 溃疡性结肠炎动物实验泄浊解毒方 IL-8 IκB-α TLR4 作用机制
分类号: R259
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的:针对溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)病机组成“泄浊升清,解毒祛瘀”之泄浊解毒方,通过动物实验,观察泄浊解毒方对溃疡性结肠炎大鼠IL-8、IκB-α及TLR4的影响,并与柳氮磺胺吡啶进行疗效比较,探讨该方治疗UC可能的作用机制,以期为UC的治疗提供新思路。方法:本研究采用三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzene-sulfonic acid,TNBS) /乙醇联合造模法诱导大鼠溃疡性结肠炎动物模型,取健康清洁级Wistar大鼠45只,体重220~250g,雄性,随机抽取8只作为空白组,其余大鼠由肛门推入含TNBS 100mg/kg的30%乙醇溶液,复制溃疡性结肠炎动物模型。3天后,随机抽取5只造模大鼠处死,取其结肠标本,病理检查确认有充血、水肿及典型溃疡形成等一系列病理变化即为造模成功。将剩余造模大鼠随机分为模型组、柳氮磺胺吡啶组、泄浊解毒方小剂量组、泄浊解毒方大剂量组4组,每组8只。空白组、模型组用生理盐水灌胃,柳氮磺胺吡啶组、泄浊解毒方小剂量组、泄浊解毒方大剂量组分别给予柳氮磺胺吡啶液0.3g/kg、泄浊解毒方水煎剂10.0g/kg、泄浊解毒方水煎剂20.0g/kg灌胃,每日1次,连续治疗14天,观察其疗效。实验从3个方面进行研究探讨。实验一观察泄浊解毒方对UC大鼠一般状况的影响,HE染色观察大鼠结肠组织病理学改变,放免法检测血清IL-8的含量;实验二采用免疫组化技术检测泄浊解毒方对UC大鼠结肠组织IκB-α蛋白表达的影响;实验三分别采用免疫组化技术、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定各组大鼠结肠TLR4蛋白及TLR4mRNA的表达,观察泄浊解毒方对UC大鼠TLR4的影响。采用SPSS 13.0进行统计学分析。通过动物实验探讨泄浊解毒方治疗溃疡性结肠炎可能的作用机制,为溃疡性结肠炎的治疗提供理论依据。结果:1实验一显示:一般状况:模型组和各治疗组大鼠与空白组相比均有不同改变,泄浊解毒方大剂量组大鼠的精神状态、反应情况、毛发光泽度、进食、体重、大便等情况均好于其它组,模型组情况最差。结肠病理组织观察:镜下模型组大鼠粘膜层缺失,可见不同程度充血、水肿、糜烂、溃疡形成;柳氮磺胺吡啶组与泄浊解毒方小剂量组溃疡较表浅,可见充血水肿及少量炎细胞浸润;泄浊解毒方大剂量组粘膜层完整,基本无充血、水肿及炎细胞浸润。病理组织学损伤评分:空白组大鼠结肠未见损伤,模型组病理组织学损伤评分明显增加,与模型组(6.375±1.188)比较,柳氮磺胺吡啶组(4.125±1.356)和泄浊解毒方大(1.625±1.060)、小(4.250±1.282)剂量组病理组织学损伤评分明显降低,均有显著性差异(P<0.01)。与柳氮磺胺吡啶组相比,泄浊解毒方小剂量组病理组织学损伤评分无显著性差异(P>0.05);泄浊解毒方大剂量组病理组织学损伤评分低于柳氮磺胺吡啶组及泄浊解毒方小剂量组,有显著性差异(P<0.01)。大鼠血清IL-8含量:与空白组(0.310±0.161)相比,模型组(0.523±0.698) IL-8含量显著升高,有显著性差异(P<0.01);柳氮磺胺吡啶组(0.389±0.118)、泄浊解毒方小剂量组(0.397±0.082)、泄浊解毒方大剂量组(0.259±0.149)均无显著性差异(P>0.05)。与模型组相比,柳氮磺胺吡啶组、泄浊解毒方小剂量组、泄浊解毒方大剂量组大鼠血清IL-8含量均明显降低,有显著性差异(P<0.05)。与柳氮磺胺吡啶组相比,泄浊解毒方大剂量组IL-8含量比柳氮磺胺吡啶组明显降低,有显著性差异(P<0.05);泄浊解毒方小剂量组无显著性差异(P>0.05)。泄浊解毒方大剂量组与泄浊解毒方小剂量组相比,IL-8含量降低,有显著性差异(P<0.05)。2实验二显示:大鼠结肠IκB-α蛋白水平的表达:与空白组(12.500±3.251)相比,模型组(49.750±8.137) IκB-α蛋白水平的表达明显升高,有显著性差异(P<0.01)。与模型组相比,柳氮磺胺吡啶组(23.875±7.415)、泄浊解毒方小剂量组(28.000±4.567)、泄浊解毒方大剂量组(17.125±5.718)IκB-α蛋白水平的表达明显降低,均有显著性差异(P<0.01)。与柳氮磺胺吡啶组相比,泄浊解毒方大剂量组IκB-α蛋白水平的表达明显低于柳氮磺胺吡啶组,有显著性差异(P<0.01);泄浊解毒方小剂量组无显著性差异(P>0.05)。泄浊解毒方大剂量组与泄浊解毒方小剂量组相比,IκB-α蛋白水平的表达降低,有显著性差异(P<0.01)。3实验三显示:大鼠结肠TLR4蛋白水平的表达:与空白组(13.500±2.449)相比,模型组(57.250±4.166) TLR4蛋白水平的表达升高,有显著性差异(P<0.01)。与模型组相比,柳氮磺胺吡啶组(37.125±3.227)、泄浊解毒方小剂量组(35.375±3.623)、泄浊解毒方大剂量组(17.625±2.066)TLR4蛋白水平的表达降低,均有显著性差异(P<0.01)。与柳氮磺胺吡啶组相比,泄浊解毒方大剂量组TLR4蛋白水平的表达明显降低,有显著性差异(P<0.01);泄浊解毒方小剂量组无显著性差异(P>0.05)。泄浊解毒方大剂量组TLR4蛋白水平的表达低于泄浊解毒方小剂量组,有显著性差异(P<0.01)。大鼠结肠TLR4mRNA的表达:与空白组(0.181±0.016)相比,模型组(0.519±0.043)TLR4mRNA表达升高,有显著性差异(P<0.01)。与模型组相比,柳氮磺胺吡啶组(0.316±0.016)、泄浊解毒方各组TLR4mRNA表达均降低,有显著性差异(P<0.01)。与柳氮磺胺吡啶组相比,泄浊解毒方大剂量组(0.149±0.037)TLR4mRNA的表达明显降低,有显著性差异(P<0.01);泄浊解毒方小剂量组(0.343±0.028)无显著性差异(P>0.05)。泄浊解毒方大剂量组TLR4蛋白水平的表达低于泄浊解毒方小剂量组,有显著性差异(P<0.01)。结论:我们经过长期的临床观察及研究,提出UC“浊毒”致病理论:浊毒壅滞肠道,脂膜血络损伤,血败肉腐,壅滞成脓;浊毒内聚不散,肠道传导失司形成本病。以“泄浊升清,解毒祛瘀”为治疗大法,组成泄浊解毒方,应用于临床疗效肯定。现复制溃疡性结肠炎大鼠模型,观察用药前后相关指标的变化。研究结果表明:泄浊解毒方能改善溃疡性结肠炎大鼠的一般状况,降低病理学损伤评分及血清IL-8的含量,降低结肠组织IκB-α、TLR4蛋白水平及TLR4mRNA的表达,从而抑制促炎细胞因子的产生,纠正免疫功能的紊乱,减轻免疫炎症反应,有利于溃疡愈合。证实了中药泄浊解毒方对实验性溃疡性结肠炎大鼠有很好的治疗作用,其治疗的机理可能与其影响免疫炎症反应过程中的部分环节有关。

全文目录

中文摘要  5-8
英文摘要  8-13
研究论文泄浊解毒方对溃疡性结肠炎大鼠IL-8、IκB-α及TLR4 的影响  13-55
  引言  13-15
  第一部分泄浊解毒方对溃疡性结肠炎大鼠一般状况、病理学及血清IL-8 的影响  15-31
    前言  15
    材料与方法  15-18
    结果  18-20
    附图  20-24
    附表  24-25
    讨论  25-28
    结论  28
    参考文献  28-31
  第二部分泄浊解毒方对溃疡性结肠炎大鼠IκB-α的影响  31-41
    前言  31
    材料与方法  31-33
    结果  33-34
    附图  34-37
    附表  37-38
    讨论  38-39
    结论  39-40
    参考文献  40-41
  第三部分泄浊解毒方对溃疡性结肠炎大鼠TLR4 的影响  41-55
    前言  41
    材料与方法  41-44
    结果  44-45
    附图  45-50
    附表  50-51
    讨论  51-52
    结论  52-53
    参考文献  53-55
综述溃疡性结肠炎的中医药治疗进展  55-60
致谢  60-61
个人简历  61

泄浊解毒方对溃疡性结肠炎大鼠IL-8、IκB-α及TLR4的影响

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