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人参皂甙Rh2对外周血干/祖细胞移植小鼠造血重建的影响及其分子机制研究

作　者: 韩霞
导　师: 王华庆
学　校: 天津医科大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 人参皂甙Rh2 造血干细胞移植造血功能重建分子机制小鼠
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

建立BALB/C小鼠外周血造血干细胞移植模型,选择中药人参皂甙Rh2为移植后处理因素,观察人参皂甙Rh2对外周血干／祖细胞移植小鼠造血重建的影响,并探讨其促进造血重建可能的分子机制。建立BALB/C小鼠外周血造血干细胞移植模型：30只BALB/C雄鼠于移植前第7天给予给予环磷酰胺(CTX)400mg/Kg腹腔注射一次,于移植前第6天至移植前1天给予G-CSF 5ug/Kg皮下注射,一日两次。移植当天摘眼球取血,密度梯度离心获得单个核细胞(MNC)悬液。另取60只BALB/C雌鼠于移植当天给予C060全身照射,剂量为7.5Gy,于照射后4-6小时内,经尾静脉回输单个核细胞悬液,每只小鼠接受5×106MNC。移植后,受体小鼠随机分为4组：A组给予生理盐水0.1ml/只腹腔注射(生理盐水组),B组给予人参皂甙Rh2 4mg/Kg腹腔注射(小剂量人参皂甙Rh2组),C组给予人参皂甙Rh2 8mg/Kg腹腔注射(大剂量人参皂甙Rh2组),D组给予G-CSF 5ug/Kg皮下注射(G-CSF组)。每天注射一次,连续10天。同时取15只小鼠不做任何处理作为正常组。移植后观察小鼠长期存活情况,计算30天存活率；每隔3-4天尾静脉取血检测外周血常规,实验第10天无菌取脾,观察脾集落(CFU-S)并计数。实验第14天、第23天行有核细胞计数并行造血细胞集落培养并计数。采用Real-time PCR方法和Western Blot方法检测正常小鼠骨髓细胞和经人参皂甙Rh2处理的小鼠骨髓细胞EPOR、JAK-2及STAT-3的mRNA及蛋白表达情况。1、各给药处理组小鼠30天存活率均显著高于生理盐水组,具有统计学差异。2、移植后,小鼠外周血中白细胞计数迅速下降,于移植后第十7至+10天降至最低,以后逐渐回升,各给药组白细胞的恢复均快于生理盐水组,且G-CSF组白细胞恢复快于Rh2单药组,但小剂量人参皂甙Rh2组与大剂量Rh2组之间未见显著差异。移植后,各组小鼠外周血中血小板数量迅速下降,于移植后第14天降至最低,后逐渐升高,各组之间未见明显差异。移植后,各组小鼠外周血中血红蛋白缓慢下降,各给药组血红蛋白高于生理盐水组,具有统计学意义。由于观察期间内(30天)血红蛋白未降至最低点,无法说明各组之间红细胞的重建情况。3、移植后第10天,各给药组小鼠CFU-S、造血集落数显著高于生理盐水组,G-CSF组高于两个人参皂甙组,但是两个人参皂甙组之间未见明显差异。4、移植后第10、14、23天,各给药组小鼠骨髓有核细胞数均显著高于生理盐水组,但两个人参皂甙Rh2组未见明显差异。5、经人参皂甙Rh2处理的小鼠骨髓细胞EPOR、JAK-2及STAT-3的mRNA及蛋白表达水平较正常小鼠骨髓细胞有不同程度的上调。人参皂甙Rh2可以促进小鼠外周血干细胞移植后血细胞数目恢复、促进骨髓单个核细胞数目恢复、造血干/祖细胞集落形成,从而促进小鼠移植后造血重建。人参皂甙Rh2促进造血重建的作用可能是通过JAK-STAT通路的激活从而上调EPOR、JAK-2及STAT-3 mRNA及蛋白表达水平实现的。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-10
前言  10-12
  研究现状、成果  10-11
  研究目的、方法  11-12
一、人参皂甙Rh2对同系外周血干/祖细胞移植小鼠造血重建的影响  12-25
  1.1 对象和方法  12-16
    1.1.1 实验材料、试剂及仪器  12-13
    1.1.2 实验方法  13-16
  1.2 结果  16-21
    1.2.1 移植后受体小鼠存活时间及30天存活率观察  16
    1.2.2 移植后定期受体小鼠血常规的检测  16-19
    1.2.3 移植后小鼠骨髓有核细胞数的变化  19
    1.2.4 移植后脾集落形成单位测定  19-20
    1.2.5 移植后造血集落观察  20-21
  1.3 讨论  21-24
  1.4 小结  24-25
二、人参皂甙Rh2对外周血干/祖细胞移植小鼠造血重建的分子机制研究  25-43
  2.1 对象和方法  25-34
    2.1.1 实验材料、试剂及仪器  25-27
    2.1.2 实验方法  27-34
      2.1.2.1 人参皂甙Rh2对小鼠骨髓细胞EPOR、JAK-2及STAT-3 mRNA表达的影响  27-32
      2.1.2.2 人参皂甙Rh2对小鼠骨髓细胞EPOR、JAK-2及STAT-3的蛋白表达的影响  32-34
  2.2 结果  34-39
    2.2.1 普通pcR扩增目的基因结果  34-35
    2.2.2 实时定量荧光定量PCR结果  35-38
    2.2.3 免疫印迹结果  38-39
  2.3 讨论  39-42
  2.4 小结  42-43
结论  43-44
参考文献  44-49
发表论文和参加科研情况说明  49-50
附录  50-52
综述  52-60
综述参考文献  60-62
致谢  62-63

人参皂甙Rh2对外周血干/祖细胞移植小鼠造血重建的影响及其分子机制研究

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