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天津地区汉族人群D18S53、D18S59、D18S488 3个短串联重复序列多态性的研究

作　者: 刘静
导　师: 岳天孚；张颖
学　校: 天津医科大学
专　业: 妇产科学
关键词: 18号染色体 遗传多态性 基因诊断 短串联重复序列 定量荧光聚合酶链式反应
分类号: R714.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的：18三体综合征(Edwards syndrome, ES)是仅次于唐氏综合征的第二种常见染色体三体综合征,发病率为1/6 000,临床表现为多发畸形,能活至3个月者约30%,1岁存活者不到10%,活至10岁者仅1-2%。目前染色体病无法根治,预防此病的有效方法是通过产前诊断阻止其出生来降低发病率。传统的产前诊断方法为染色体核型分析,所需周期长,技术要求高,不适合大样本的检测。这就迫切需要建立快速产前诊断染色体数目异常的方法,满足日益增长的产前诊断的需要。本研究旨在获取天津地区汉族人群中18号染色体上D18S53、D18S59和D18S488 3个STR基因座的群体遗传学数据,进行遗传多态性的研究,为建立一种准确、快速、简便的诊断18号染色体数目异常的方法提供实验数据。方法：抽取369例无血缘关系天津地区汉族染色体正常个体外周血,盐析法提取基因组DNA,正向引物5’端均由荧光染料5-羧基-荧光素标记,采用定量荧光PCR技术扩增18号染色体上D18S53、D18S5、D18S4883个短串联重复序列基因座,ABI PRISM 377测序电泳及相应软件分析扩增产物,进行遗传多态性研究。按照等位基因片段大小进行等位基因分型,用Hardy-Weinberg平衡对结果进行χ2检验,并将基因型分布的数据通过PowerStatsV12软件进行统计分析,计算3个STR基因座的观察杂合度、多态信息量、个体识别率和非父排除率等群体遗传学数据,并累计计算这3个短串联重复序列基因座的群体遗传学数据。结果：1、本实验中369例样本均扩增成功,结果均显示为正常二倍体,未发现三体样本。2、通过对D18S53、D18S59和D18S488 3个STR基因座的扩增,获取3个STR基因座的等位基因数、基因频率、基因型频率。基因型分布经χ2检验均符合Hardy-Weinberg平衡定律。3、D18S53、D18S59和D18S488 3个STR基因座观察杂合度分别为76.7%、76.2%、70.5%；多态信息含量分别为0.80、0.73、0.65；个体识别率分别为0.947、0.907、0.851；非父排除率分别为0.539、0.530、0.435。4、D18S53、D18S59和D18S488 3个短串联重复序列基因座累计多态信息量为0.9811、累计个体识别率为0.999265579、累计非父排除率为0.87758145。结论：1、D18S53、D18S59和D18S488 3个STR基因座基因型在天津汉族人群中分布均符合Hardy-Weinberg平衡,说明所选取的样本可以代表天津地区汉族群体的遗传多态性。2、D18S53、D18S59和D18S488 3个STR基因座杂合度高,多态信息含量高,个体识别率高,可以作为18号染色体良好的遗传标记。3、本研究获取了D18S53、D18S59和D18S488 3个STR基因座在天津地区汉族人群的群体遗传学数据,为18三体综合症的基因诊断提供理论依据,也为这些遗传标记在我国人群中进行亲子鉴定和个体识别提供概率计算依据。对法医学应用、人类遗传学研究有重要价值。4、定量荧光聚合酶链式反应扩增D18S53、D18S59和D18S488,进行多态性研究和染色体数目的诊断,结果准确,且该方法简便、快速,在临床上有广阔的应用前景。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-10
缩略语/符号说明  10-11
前言  11-15
  研究现状、成果  11-14
  研究目的、方法  14-15
天津地区汉族人群D18S53、D18S59、D18S488 3个短串联重复序列多态性的研究  15-49
  1. 对象和方法  15-20
    1.1 主要试剂  15
    1.2 主要试剂的配制  15
    1.3 主要仪器设备和工具软件  15-16
    1.4 实验对象  16
    1.5 实验方法  16-19
      1.5.1 外周血WBC的分离  16
      1.5.2 外周血DNA提取(盐析法)  16-17
      1.5.3 引物的选择与合成  17
      1.5.4 PCR扩增  17-18
      1.5.5 PCR扩增产物的检测  18-19
    1.6 统计学分析  19-20
  2. 结果  20-31
    2.1 DNA的提取  20
    2.2 DNA的扩增  20-29
      2.2.1 D18S53 STR基因座  20-23
      2.2.2 D18S59 STR基因座  23-27
      2.2.3 D18S488 STR基因座  27-29
    2.3 3个STR基因座的群体遗传学数据  29-31
  3. 讨论  31-43
    3.1 STR基因座的形成及特点  31-33
    3.2 STR的分型技术剂检测  33-35
      3.2.1 聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳技术  33
      3.2.2 聚丙烯酰胺凝胶水平不连续电泳技术  33-34
      3.2.3 水平式琼脂糖凝胶电泳技术  34
      3.2.4 变性梯度凝胶电泳技术  34
      3.2.5 应用DNA测序仪直接分型技术  34-35
    3.3 STR的应用  35-39
      3.3.1 STR作为遗传标记  35
      3.3.2 STR用于人类基因遗传图谱的制作  35
      3.3.3 STR用于法医学个体识别和亲权鉴定  35-36
      3.3.4 STR用于群体遗传学  36-37
      3.3.5 STR与染色体数目异常疾病的基因诊断  37-39
      3.3.6 STR用于遗传性疾病的基因诊断  39
    3.4 STR基因座的选择  39-41
    3.5 试验中应注意的问题  41-43
  结论  43-44
  参考文献  44-49
发表论文和参加科研情况说明  49-50
综述  50-57
  PCR技术在产前诊断胎儿非整倍体的应用  50-54
  综述参考文献  54-57
致谢  57

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中图分类: > 医药、卫生 > 妇产科学 > 产科学 > 胎儿
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