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趋化因子配体16在胰腺癌细胞株中的表达及对其生物学行为的影响

作　者: 杜杰
导　师: 江涛；王西墨
学　校: 天津医科大学
专　业: 外科学
关键词: 胰腺癌 趋化因子配体16 细胞增殖 细胞粘附 细胞侵袭 细胞迁移
分类号: R735.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的探讨趋化因子配体16(CXCL16)在胰腺癌组织和细胞系中的表达,并研究其影响因素及外源性CXCL16对胰腺癌细胞系生物学行为的影响。方法用免疫组化方法检测30例胰腺癌及癌旁组织中CXCL16的表达,并分析其与临床分期、淋巴结转移及组织分化的关系。用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附方法(ELISA)检测胰腺癌细胞系PANC-1和ASPC-1中CXCL16转录和翻译水平的表达。细胞因子TNF-a、IL-1β在10、50、100、200ng/ml浓度下分别加入细胞系中,并用ELISA检测CXCL16的分泌,不加TNF-a和IL-1B作为对照。另外,对比同时加入200ng/ml的TNF-a和IL-1B较单一因素对CXCL16分泌的影响。取对数生长期的胰腺癌细胞系PANC-1和ASPC-1,分别加入50、100、200ng/ml的rh CXCL16和CXCL16中和性抗体,以不加rhCXCL16作为对照组。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,采用Matrigel基质胶检测细胞的粘附率，采用Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力。结果CXCL16在80.00%的胰腺癌中表达,仅在26.67%的癌旁组织中表达(P<0.005)。CXCL16的表达与TNM分期和淋巴结转移呈正相关(P<0.05),而与组织分化无关。CXCL16mRNA电泳条带可以用RT-PCR方法检测到。106/ml细胞浓度下,PANC-1和ASPC-1的CXCL16 OD值分别为215.3±14.9和170.0±11.6。TNF-a于200ng/ml浓度下,PANC-1和ASPC-1 CXCL16 OD值分别为460.3±46.4和421.5±44.6,显著高于对照组的90.7±3.5和83.2±4.5(P<0.05)。IL-1B于200ng/ml浓度下,PANC-1和ASPC-1 CXCL16 OD值分别为421.5±44.6和367.7±46.0,显著高于对照组的90.7±3.5和83.2±4.5(P<0.05)。TNF-a和IL-1β于200ng/ml浓度共同作用下,PANC-1和ASPC-1 CXCL16 OD值为481.2±50.0和433.3±45.0,与对照组无明显差异。100ng/ml rh CXCL16处理PANC-1后,细胞增殖、粘附率、侵袭性和迁移性分别为0.227±0.021、(91.4±8.6)%、1.246±0.216、1.361±0.276,其中细胞对基质的粘附率、侵袭性和迁移性显著高于对照组的(20.6±3.2)%、0.259±0.013、0.199±0.008(P<0.05),对增殖性无显著影响。200ng/ml rh CXCL16处理PANC-1后,细胞对基质的粘附率、侵袭性和迁移性进一步提高到(92.1±6.3)%、1.511±0.174、1.600±0.208(P<0.05)。100ng/ml rh CXCL16处理ASPC-1后,细胞增殖、粘附率、侵袭性和迁移性分别为0.249±0.016、(89.9±6.7)%、1.646±0.200、1.596±0.211,其中细胞对基质的粘附率、侵袭性和迁移性显著高于对照组的(21.6±3.8)%、0.245±0.012、0.190±0.010(P<0.05),对增殖性无显著影响。200ng/ml rh CXCL16处理ASPC-1后,细胞对基质的粘附率、侵袭性和迁移性进一步提高到(94.0±8.2)%、1.876±0.290、1.900±0.237(P<0.05)。结论CXCL16在胰腺癌组织中较癌旁组织显著性高表达,并协同癌的发展。在转录和翻译水平上,PANC-1和ASPC-1存在CXCL16mRNA和蛋白的表达。TNF-a和IL-1β可分别促进细胞系分泌CXCL16,但二者联合较单一因素并无显著性增强。rh CXCL16可诱导胰腺癌细胞系PANC-1和ASPC-1增强对基质的粘附性、侵袭性和迁移性,但对增殖性无显著提高作用。

全文目录


中文摘要  6-8
Abstract  8-10
缩略语/符号说明  10-11
前言  11-14
材料与方法  14-37
  一、实验材料  14
  二、主要试剂  14-15
  三、主要器材  15-17
  四、免疫组化检测胰腺癌病理标本中CXCL16蛋白水平表达  17-19
  五、细胞培养、传代  19-21
  六、RT-PCR检测mRNA的表达  21-28
  七、ELISA测定细胞上清液CXCL16蛋白水平表达  28-29
  八、ELISA测定炎性因子TNF-a、IL-1β对CXCL16分泌的影响  29-30
  九、外源性CXCL16对胰腺癌细胞生物学行为的影响  30-37
    1 细胞增殖动力学  30-31
    2 粘附性  31-32
    3 侵袭性  32-36
    4 迁移性  36-37
结果  37-49
  一、标本信息  37
  二、胰腺癌标本CXCL16免疫组化结果  37-39
  三、胰腺癌细胞株的培养  39
  四、RT-PCR检测mRNA表达水平  39-41
  五、细胞上清液CXCL16蛋白水平表达  41-42
  六、炎性因子TNF-a、IL-1β对CXCL16分泌的影响  42-44
  七、外源性CXCL16对胰腺癌细胞生物学行为的影响  44-49
    1 细胞增殖能力  44-45
    2 粘附性  45-47
    3 侵袭性  47
    4 迁移性  47-49
讨论  49-60
参考文献  60-65
发表论文和参加科研情况说明  65-66
附录  66-71
综述  71-81
综述参考文献  81-87
致谢  87-88

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 胰腺肿瘤
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