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植物内生菌绿色木霉（Trichoderma viride）对油菜菌核病的生物防治

作　者: 何明静
导　师: 黄云
学　校: 四川农业大学
专　业: 植物病理
关键词: 内生真菌 绿色木霉 油菜菌核病 生物防治 定殖
分类号: S476
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


油菜菌核病是一种世界性病害,在五大洲的100多个国家皆有发生,其地理分布极为广泛。它是由核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)引起的一种真菌病害。在中国,油菜菌核病居油菜三大病害之首,一般发病率为10%～30%,严重时可以达到80%以上。在长江中、下游及东南沿海一些主要的油菜产区,包括江苏、安徽、上海、湖南、浙江、江西、湖北等地病害的发生尤为突出,严重影响了我国的油菜生产。本实验从千年古银杏树、茶树以及红豆树的根、茎、叶内分离内生真菌和根际土壤中分离真菌,筛选出对油菜菌核病有拮抗作用的生防真菌；通过室内拮抗、孢子萌发等试验及定殖、缽栽、田间防病实验,探明拮抗真菌对油菜菌核病的生防潜能,取得以下研究结果。1、生防真菌的分离、筛选和鉴定对从四川省雅安市采集的银杏树、茶树以及红豆树等3种植物的根、茎、叶内生真菌和根际土壤种分离真菌,共分离得到内生真菌73株、根际土壤真菌29株；通过对油菜菌核病菌的拮抗试验,筛选出有较强拮抗作用的红豆树内生真菌1株。通过形态鉴定,将该内生真菌鉴定为绿色木霉(Trichoderma viride)。2、绿色木霉(T. viride)对油菜菌核病菌的拮抗作用和对子囊孢子萌发的影响利用绿色木霉(T. viride, HJZ3)菌株的发酵液抑制油菜菌核病菌菌丝生长的实验,测定抑制率达到90%以上；采用发酵液浸泡菌核和发酵液加入PDA平板两种试验方法,测定HJZ3对油菜菌核萌发的抑制率,发酵液稀释2倍时,对油菜菌核病菌菌核萌的抑制率分别为66%,60%；在稀释5倍时,对菌核萌发的抑制作用相比较稀释2倍时有所下降,抑菌率分别降低为30%,34%。HJZ3发酵液在稀释2倍,5倍,10倍时,菌核病菌子囊孢子的萌发率分别为58.3%,85.8%,90.4%,HJZ3菌株在稀释2倍,5倍,10倍时孢子的萌发率分别为6.9%,23.1%,53.6%。3、绿色木霉(T. viride)在油菜体内的定殖通过药物链霉素标记绿色木霉(T.viride),在油菜植株根际土壤及油菜植株体内的定殖能力进行测定。试验结果证明：HJZ3能够较好的在油菜植株根际及体内定殖,菌株直接灌根处理接种后的第3d,在苗根部分离到的菌量达204cfu/mg,显著高于茎和叶,说明菌株易进入油菜苗体内。并且于接菌后3、5、8、11、15d随机取5株油菜苗进行标记菌的分离,试验证明,标记的HJZ3菌株可在油菜根际土中及其定殖。4、绿色木霉(T. viride)对油菜的生长的影响拮抗菌液浸种对油菜种子的出苗率、植株生长有显著的促进作用。其中,接种的种子出苗率较未接种的对照提高了2.29(P<0.05),并且出苗整齐、迅速；植株株高、干物质重量均明显高于清水对照,差异达到了显著水平(P<0.05)或极显著水平(P<0.01)。5、绿色木霉(T. viride)对油菜菌核病的室内及田间控病效果进行室内盆栽试验,对照病斑大小为23.4mm,供试的两种化学药剂及生防菌液的处理病斑大小均在5～10mm之间,对比试验结果,筛选出的拮抗真菌对油菜菌核病确实有明显的抑制作用；在田间试验中,统计油菜菌核病的田间病株率,对照高达94.2%,两种化学药剂及生防菌液的处理均在50%～60%之间,对照的病情指数为71.7%,生防菌液为17.5%,两种化学药剂和生防菌液的田间防效均在65%～70%,但是生防菌液处理与之前室内盆栽试验的抗病效果有了一定的差异,这可能与复杂多变的自然环境的影响有关,导致拮抗菌在油菜植株体内的定殖能力受到影响。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-11
1 文献综述  11-18
  1.1 油菜菌核病的概述  11-16
    1.1.1 危害症状  11
    1.1.2 病原及其病害循环  11-12
    1.1.3 防治措施  12-16
  1.2 生防菌的定殖研究概况  16
  1.3 研究目的与意义  16-18
2 材料与方法  18-26
  2.1 油菜菌核病生防菌的分离与筛选  18-20
    2.1.1 供试材料  18
    2.1.2 试验方案与方法  18-20
  2.2 油菜菌核病生防菌的鉴定  20
    2.2.1 培养性状  20
    2.2.2 形态鉴定  20
  2.3 绿色木霉菌株控制核盘菌作用的研究  20-22
    2.3.1 绿色木霉发酵液的获得  20
    2.3.2 无菌滤液制备  20-21
    2.3.3 抑制菌丝生长  21
    2.3.4 抑制菌核萌发  21
    2.3.5 抑制菌核形成  21-22
    2.3.6 抑制子囊孢子萌发  22
  2.4 绿色木霉菌株的标记与定殖  22-23
    2.4.1 绿色木霉菌抗药性标记  22
    2.4.2 绿色木霉菌定殖能力测定  22-23
    2.4.3 再分离绿色木霉菌株与出发原始菌株对核盘菌拮抗性的比较  23
  2.5 绿色木霉对植株的促生作用  23
    2.5.1 油菜种子内生菌的消除  23
    2.5.2 绿色木霉对植株生长的影响  23
  2.6 室内盆栽实验  23-24
    2.6.1 接种体制备  23-24
    2.6.2 盆栽实验  24
  2.7 田间实验  24-26
3 结果与分析  26-37
  3.1 油菜菌核病生防菌的分离与筛选  26-27
    3.1.1 供试材料根际土壤及内生真菌的分离  26
    3.1.2 供试材料根际土壤及内生真菌的筛选  26-27
  3.2 木霉生防菌的鉴定  27-28
  3.3 绿色木霉菌菌株控制核盘菌作用的研究  28-31
    3.3.1 抑制菌丝生长  28
    3.3.2 抑制菌核萌发  28-29
    3.3.3 抑制菌核形成  29-30
    3.3.4 抑制子囊孢子萌发  30-31
  3.4 绿色木霉菌株的标记与定殖  31-33
    3.4.1 绿色木霉菌株的抗药性标记  31
    3.4.2 绿色木霉菌株的定殖  31-33
    3.4.3 绿色木霉菌株对核盘菌的拮抗活性  33
  3.5 绿色木霉对油菜植株生长的影响  33-34
  3.6 室内盆栽试验  34
  3.7 田间试验  34-37
    3.7.1 油菜菌核病病情严重度田间调查  34-35
    3.7.2 油菜菌核病病情严重度统计  35-37
4 结论与讨论  37-41
  4.1 油菜菌核病生防菌的分离与筛选  37
  4.2 油菜菌核病生防菌的鉴定  37-38
  4.3 绿色木霉菌株控制核盘菌作用的研究  38
  4.4 绿色木霉菌株的标记与定殖  38-39
    4.4.1 绿色木霉菌株的抗药性标记  38
    4.4.2 绿色木霉在油菜根际土及油菜体内的定殖  38-39
    4.4.3 绿色木霉对核盘菌的拮抗活性  39
  4.5 绿色木霉菌对植株生长的影响  39
  4.6 室内盆栽试验  39-40
  4.7 田间试验  40-41
参考文献  41-45
致谢  45

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中图分类: > 农业科学 > 植物保护 > 各种防治方法 > 生物防治
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