学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

稻瘟病生防菌Af1、Af4的初步研究

作　者: 金鑫
导　师: 罗朝喜
学　校: 华中农业大学
专　业: 植物病理学
关键词: 枯草芽孢杆菌稻瘟病菌拮抗作用脂肽抗生素抗真菌蛋白生物防治
分类号: S476
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 69次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

从水稻叶片上分离得到两株生防细菌,将其分别命名为：Af1、Af4。本实验研究内容主要包括：1.通过培养特征、形态学特征、生理生化特征以及16S rRNA序列同源性分析对拮抗菌Af1、Af4进行鉴定。2.通过对稻瘟病菌丝生长的抑制实验、对孢子萌发的抑制实验、广谱抑菌实验以及不同培养时间、不同浓度、不同pH值的发酵液对稻瘟病菌的拮抗性测定等实验对Af1、Af4进行抑菌活性鉴定。3.按照蛋白和脂肽类抗生素分离纯化方法定向地对Af1、Af4发酵液活性物质进行提取,获得粗提物质,并对粗提物质的生化特性进行研究,最后对脂肽类抗生素合成相关基因进行检测。4.水稻叶片离体接种实验,对Al1、Af4进行生物防效测定。结果表明：1.通过鉴定表明Af1、Af4两个生防菌株同为枯草芽孢杆菌,两者的理化特征大致相似,但是Afl能够产生色素,而Af4不能够产生色素。2.Af1对稻瘟病菌的抑菌半径达到22 mm,Af4对稻瘟病菌的抑菌半径达到23 mm；Af1和Af4均能抑制稻瘟病孢子的萌发,当发酵液浓度为1：1(50%)时,抑制率最高分别可达到88%和92%,当浓度降低到1：124(0.8%)时,抑制率则为16.4%和46%；Af1、Af4具有广谱抑菌作用,除Af1对水稻纹枯病无作用外,Af1、Af4对稻瘟病菌、稻曲病菌等十种供试病原菌均具有抑制作用；Af1、Af4的发酵液在不同浓度梯度检测,均具有抑菌活性；Af1在发酵液培养5 d时抑菌活性最高,而Af4在3 d-4d抑菌活性最高,且两者都耐高温；两者均不能耐酸性环境,适宜在中偏碱性的环境下生存,Afl在发酵液pH 8时,抑菌活性最高,Af4在pH 7时有较高抑菌活性。3.Af1产生多种类型的抗真菌物质,其中包括蛋白质和抗生素,抗生素粗提物对温度、蛋白酶K不敏感,而蛋白质粗提物对蛋白酶K敏感,对温度不敏感,并能够抑制稻瘟病菌黑色素的形成；Af4发酵液粗提物与脂肽类抗生素一致,对温度、对蛋白酶K不敏感；从Af1中检测到fenB、sfp、ituA三个脂肽抗生素合成相关基因,而从Af4中检测到mycB、fenB、sfp、ituA四个脂肽抗生素合成相关基因,表明两个菌株都能够合成抗生素类物质。4.生物防效测定结果表明,菌株Af1,Af4发酵液在不同浓度梯度下均具有生防效果,且Af1的生防效果要略好于Af4的生防效果,二者在1：249低浓度下仍具有防病效果,且效果持续稳定。

全文目录

摘要  8-9
Abstract  9-11
第一章前言  11-40
  1 文献综述  11-39
    1.1 稻瘟病的综合防治  11-13
    1.2 芽孢杆菌在植物病害生物防治中的应用和主要作用机制  13-23
      1.2.1 生防细菌的研究历史及现状  13-17
      1.2.2 枯草芽孢杆菌生防研究进展  17-19
        1.2.2.1 国外枯草芽孢杆菌的研究状况  17-18
        1.2.2.2 国内枯草芽孢杆菌的研究状况  18-19
      1.2.3 芽孢杆菌生物防治主要作用机制  19-23
        1.2.3.1 营养和空间位点的竞争  19-20
        1.2.3.2 拮抗作用  20-21
        1.2.3.3 寄生作用  21
        1.2.3.4 诱导植物产生抗病性  21-22
        1.2.3.5 促进植物生长  22-23
    1.3 生物农药及其发展前景  23-29
      1.3.1 生物农药  23-25
        1.3.1.1 植物体生物农药  24-25
        1.3.1.2 微生物体生物农药  25
        1.3.1.3 动物体生物农药  25
      1.3.2 生物化学农药  25-27
        1.3.2.1 微生物性生化农药  25-26
        1.3.2.2 植物性生化农药  26-27
        1.3.2.3 动物性生化农药  27
      1.3.3 转基因生物农药  27-28
      1.3.4 生物农药的发展前景  28-29
    1.4 芽孢杆菌抗菌蛋白的研究概况  29-39
      1.4.1 前沿  29-31
      1.4.2 抗菌蛋白的总种类及应用  31-37
        1.4.2.1 动物的抗菌蛋白  31-32
        1.4.2.2 植物抗菌肽  32-33
        1.4.2.3 微生物抗菌肽  33-37
      1.4.3 抗菌蛋白的分离与纯化  37
      1.4.4 展望  37-39
  2 研究目的和意义  39-40
第二章水稻稻瘟病拮抗菌的分离与鉴定  40-51
  1 材料与方法  40-46
    1.1 材料  40-43
      1.1.1 主要试剂  40-41
      1.1.2 主要仪器设备  41-42
      1.1.3 主要培养基  42
      1.1.4 试剂盒  42-43
    1.2 方法  43-46
      1.2.1 拮抗菌的分离  43
      1.2.2 形态结构的观察  43
      1.2.3 培养特征观察  43
      1.2.4 生理生化实验  43-45
        1.2.4.1 蔗糖水解试验  43
        1.2.4.2 需氧性测定  43-44
        1.2.4.3 淀粉水解  44
        1.2.4.4 甲基红(M.R)反应  44
        1.2.4.5 乙酰甲基甲醇试验(V-P试验)  44
        1.2.4.6 硝酸还原试验  44
        1.2.4.7 pH生长测定  44
        1.2.4.8 耐盐性试验  44-45
        1.2.4.9 明胶液化试验  45
      1.2.5 拮抗菌Af1、Af4的16S rRNA鉴定  45-46
        1.2.5.1 菌株Af1、Af4基因组DNA提取  45
        1.1.5.2 PCR扩增  45-46
        1.2.5.3 琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物  46
        1.2.5.4 DNA片段的切胶纯化  46
        1.2.5.5 序列分析  46
  2 结果与分析  46-49
    2.1 形态结构特征  46
    2.2 培养特征  46-47
    2.3 生理生化特征  47-48
    2.4 PCR扩增结果  48-49
    2.5 测序结果核苷酸序列同源性分析  49
  3 小结与讨论  49-51
    3.1 小结  49
    3.2 讨论  49-51
第三章拮抗菌Af1、Af4的抗菌活性鉴定  51-63
  1 材料和方法  51-54
    1.1 材料  51
      1.1.1 菌株  51
      1.1.2 主要仪器设备  51
    1.2 方法  51-54
      1.2.1 菌株的活化  51-52
        1.2.1.1 拮抗菌活化  51
        1.2.1.2 病原真菌的活化  51-52
      1.2.2 拮抗菌的液体培养  52
      1.2.3 病原真菌的液体培养  52
      1.2.4 拮抗菌Af1、Af4抗菌活性的测定  52-53
        1.2.4.1 拮抗菌Af1、Af4对稻瘟病菌的抑制作用  52
        1.2.4.2 拮抗菌Af1、Af4对稻瘟病菌菌丝生长的影响  52
        1.2.4.3 拮抗菌Af1、Af4对稻瘟病菌孢子萌发的影响  52-53
        1.2.4.4 拮抗菌Af1、Af4的抑菌谱实验  53
      1.2.5 拮抗菌Af1、Af4发酵液的拮抗性测定  53-54
        1.2.5.1 不同浓度的发酵液对稻瘟病菌的拮抗性测定  53
        1.2.5.2 不同处理时间的发酵液对稻瘟病菌的拮抗性测定  53-54
        1.2.5.3 不同pH值的发酵液对稻瘟病菌的拮抗性测定  54
      1.2.6 实验数据分析  54
  2 结果与分析  54-60
    2.1 拮抗菌Af1、Af4对稻瘟病菌的抑制作用  54-55
    2.2 拮抗菌Af1、Af4对稻瘟病菌菌丝生长的影响  55-56
    2.3 拮抗菌Af1、Af4对稻瘟病菌孢子萌发的影响  56-57
    2.4 拮抗菌Af1、Af4的抑菌谱实验  57-58
    2.5 拮抗菌Af1、Af4发酵液的拮抗性测定  58-60
      2.5.1 不同浓度的发酵液对稻瘟病菌的拮抗性测定  58-59
      2.5.2 不同处理时间的发酵液对稻瘟病菌的拮抗性测定  59-60
      2.5.3 不同pH值的发酵液对稻瘟病菌的拮抗性测定  60
  3 小结与讨论  60-63
    3.1 小结  60-61
    3.2 讨论  61-63
第四章抗菌物质的初步研究  63-80
  1 材料和方法  63-69
    1.1 材料  63-64
      1.1.1 相关试剂、缓冲液的配制  63-64
      1.1.2 主要仪器设备  64
    1.2 方法  64-69
      1.2.1 粗提蛋白的获得以及活性检测  64-66
        1.2.1.1 粗提蛋白的制备-(NH4)2SO4沉淀法  64-65
        1.2.1.2 蛋白粗提物的活性检测  65
        1.2.1.3 蛋白粗提物抑制稻瘟病菌黑色素形成的检测  65
        1.2.1.4 SDS-PAGE检测  65-66
      1.2.2 脂肽类抗生素分离纯化与活性检测  66-67
        1.2.2.1 浓盐酸沉淀法获得脂肽类抗生素粗提物  66-67
        1.2.2.2 脂肽类抗生素粗提物的活性检测  67
      1.2.3 活性粗提物对温度、蛋白酶K的稳定性检测  67-68
      1.2.4 脂肽类抗生素合成相关基因的克隆与测序  68-69
        1.2.4.1 引物设计  68
        1.2.4.2 菌株Af1、Af4基因组DNA提取  68
        1.2.4.3 PCR扩增  68-69
        1.2.4.4 琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物  69
        1.2.4.5 DNA片段的切胶纯化  69
        1.2.4.6 序列分析  69
  2 结果与分析  69-80
    2.1 拮抗菌Af1、Af4蛋白粗提物的活性检测  69-72
      2.1.1 粗提物抑制黑色素的形成  69-70
      2.1.2 拮抗菌Af1发酵液含有非蛋白类抗菌物质  70-71
      2.1.3 对蛋白粗提物SDS-PAGE的检测结果  71-72
    2.2 拮抗菌Af1、Af4抗生素粗提物质的活性检测  72-75
      2.2.1 脂肽类抗生素粗提物抑制稻瘟病菌菌丝的生长  72-73
      2.2.2 脂肽类抗生素粗提物质对温度、蛋白酶K的稳定性  73-75
    2.3 脂肽类抗生素相关基因克隆测序  75-78
      2.3.1 PCR扩增结果  75
      2.3.2 测序结果同源性分析  75-76
      2.3.3 氨基酸序列比较分析  76-78
    3 小结与讨论  78-80
      3.1 小结  78
      3.2 讨论  78-80
第五章拮抗菌Af1、Af4发酵液对稻瘟病的防效测定  80-83
  1 材料和方法  80-81
    1.1 材料  80
      1.1.1 水稻品种  80
      1.1.2 培养基  80
    1.2 实验方法  80-81
      1.2.1 接种体的制备  80
      1.2.2 水稻苗的种植  80
      1.2.3 水稻叶片的离体接种  80-81
  2 结果与分析  81-83
3 小结与讨论  83-85
  3.1 小结  83
  3.2 讨论  83-85
参考文献  85-92
致谢  92-93
附录  93-101
  附录A 相关基因PCR扩增结果  93-95
  附录B 实验中所用图表对映的数据  95-99
  附录C 实验图片  99-101

稻瘟病生防菌Af1、Af4的初步研究

内容摘要

全文目录

相似论文