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梨茎尖和叶片高效离体繁殖再生体系建立

作　者: 宗娟
导　师: 朱立武
学　校: 安徽农业大学
专　业: 果树学
关键词: 梨 茎尖 初代培养 增殖培养 叶片 再生 生根培养
分类号: S661.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


建立稳定、高效的叶片不定梢再生体系是梨转基因成功的关键环节。为此本试验以梨离体芽苞作外植体,在初代培养诱导试管苗成功的基础上,分别以MS、AS和1/2 MS培养基为基本培养基,附加不同的激素组合,根据培养基配方及培养条件,通过正交试验设计并结合方差分析和多重比较,研究不同培养基对梨试管苗芽增殖影响;叶片愈伤组织的诱导及愈伤组织的分化和试管苗生根的影响。试验研究获得的主要结果如下:1、外植体消毒及初代培养将外植体用75%酒精处理10 s后再用0.1% HgCl2消毒4 min时,取得最佳消毒效果。外植体芽诱导的适宜培养基为1/2 MS + 6-BA 0.5 mg/L + NAA 0.2 mg/L。2、增殖培养鸭梨茎段增殖的适宜培养培养条件是以1/2 MS为基本培养基,附加0.8 mg/L的6-BA ; 0.3 mg/L的IBA及0.5 mg/L的GA3,增殖倍数为3.83;黄冠梨茎段增殖的适宜培养条件是以AS为基本培养基,附加0.8 mg/L的6-BA;0.1 mg/L的IBA及0.5 mg/L的GA3,增殖倍数为3.56;基本培养基对梨茎段增殖和生长无显著影响;不同浓度的6-BA处理,差异达到了显著水平。3、愈伤组织的诱导与再生试验从两个梨品种叶片上再生出不定芽,建立起黄冠和鸭梨叶片再生不定芽体系。叶片离体培养以1/2 MS培养基为基本培养基,附加不同浓度TDZ和IBA,结果以1/2 MS附加2.5 mg/L的TDZ及0.5 mg/L的IBA适宜鸭梨叶片诱导愈伤及分化的培养基组合;以1/2 MS附加0.5 mg/L的TDZ及0.5 mg/L的IBA为适宜黄冠叶片诱导愈伤组织及分化的培养基组合;在适宜条件下,鸭梨和黄冠叶片再生频率达到65.28%和66.67%,平均再生芽数为4.78和3.17。4、梨苗生根以1/2 MS + 1.0 mg/L IBA的培养基诱导鸭梨和黄冠的生根效果稍好,生根数、根长,统计均显著高于其他处理。

全文目录


中文摘要  4-5
Abstract  5-10
1 文献综述  10-19
  1.1 梨组织培养的现状  10-13
  1.2 梨组织培养的应用研究  13-16
    1.2.1 快速繁殖  13
    1.2.2 茎尖培养脱病毒  13-14
    1.2.3 遗传转化  14
    1.2.4 种质保存  14-15
    1.2.5 叶片培养  15-16
  1.3 梨离体培养的影响因素  16-18
    1.3.1 外植体的取材时间  16
    1.3.2 外植体的消毒处理  16-17
    1.3.3 培养基  17
    1.3.4 植物生长调节剂  17-18
  1.4 梨组织培养存在的问题  18-19
2 引言  19-21
  2.1 研究主要内容、目的和意义  19-20
  2.2 技术路线  20-21
3 材料与方法  21-25
  3.1 材料  21
  3.2 仪器与试剂  21-22
    3.2.1 主要试剂  21
    3.2.2 主要仪器  21-22
  3.3 方法  22-25
    3.3.1 初代培养  22
    3.3.2 增殖培养  22-23
    3.3.3 叶片再生培养  23
    3.3.4 无菌茎段生根培养  23
    3.3.5 调查统计指标  23-24
    3.3.6 数据处理方法  24-25
4 结果与分析  25-31
  4.1 初代培养  25-26
    4.1.1 不同消毒时间对外植体的影响  25
    4.1.2 培养条件对梨苗褐变的影响  25-26
  4.2 增殖培养  26-27
    4.2.1 6-BA 对梨组培苗增殖和生长的影响  26
    4.2.2 IBA 和培养基对组培梨苗增殖和生长的影响  26-27
  4.3 叶片再生培养  27-29
    4.3.1 外植体愈伤组织的诱导  27-28
    4.3.2 不定芽的诱导  28-29
  4.4 生根培养基的筛选  29-31
5 讨论  31-33
  5.1 外植体褐变与增殖  31
    5.1.1 初代培养中外植体褐化的控制  31
    5.1.2 培养基中激素对增殖的影响  31
  5.2 梨苗生根  31-33
    5.2.1 生根过程中激素的选择  31-32
    5.2.2 生根效果  32-33
6 结论  33-34
参考文献  34-38
附图  38-42
  1、黄冠和鸭梨初代培养图片  38-39
  2、黄冠和鸭梨增殖培养图片  39-40
  3、黄冠和鸭梨叶片再生培养的图片  40-41
  4、黄冠和鸭梨生根培养的图片  41-42
致谢  42-43
作者简介  43-44

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中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 果树园艺 > 仁果类 > 梨
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