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曼地亚红豆杉组培快繁技术的研究

作　者: 翟合欢
导　师: 傅玉兰
学　校: 安徽农业大学
专　业: 园林植物与观赏园艺
关键词: 曼地亚红豆杉 组织培养 外植体 褐变 继代增殖
分类号: S791.49
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


曼地亚红豆杉是一种集经济价值与观赏价值为一体的珍贵树种,更由于其含有抗癌活性的紫杉醇而备受关注,但是该属植物生长十分缓慢,自然更新困难,因此,红豆杉属植物的资源保护和再生问题受到了人们的重视,而建立和完善曼地亚红豆杉组培快繁技术是解决资源短缺等问题的重要途径。本实验以曼地亚红豆杉幼嫩茎段为外植体,研究外植体最佳灭菌方法、腋芽诱导最佳培养基配方、褐变影响因子以及丛生芽继代增殖最佳培养基配方,数据采用SAS软件分析,意图通过上述试验,全面研究曼地亚红豆杉组培快繁各阶段的主要影响因素和最佳培养基配方,筛选出最优技术参数组合,逐步完善红豆杉植株的离体培养技术体系,早日实现产业化生产,保护该树种的现有资源。通过实验研究取得了以下结果:1.曼地亚红豆杉外植体——幼嫩茎段最佳的灭菌方法是:曼地亚红豆杉茎段→洗衣粉上清液浸泡20 min后再用软刷刷去表面污垢→流水冲洗30 min→超净台上用70 %酒精浸泡20 s→无菌水冲洗2次→0.3 %升汞浸6 min→无菌水冲洗8次→无菌滤纸吸干水分→切成约1.5 cm的小茎段→接种,成活率达83.3 %。2.曼地亚红豆杉腋芽诱导的最适宜培养基是MS+6-BA 1.0 mg-L-1+NAA 0.4 mg-L-1+ AC 0.5 g-L-1+食糖30 g-L-1+琼脂8 g-L-1,pH 5.8-6.0。3.在空白培养基（不添加任何激素的MS基本培养基）中连续培养两周能有效降低褐变率,但污染率也随之增加,所以不做任何预处理更适合曼地亚红豆杉的下一步组培实验。活性炭浓度对曼地亚红豆杉外植体的褐变有极显著影响,添加0.4g-L-1的活性炭对抑制外植体褐变的效果最佳,但随着活性炭浓度的继续增加效果反而降低。PVP抑制外植体褐变的最佳浓度为100 mg-L-1,VC抑制外植体褐变的最佳浓度为0.3g-L-1,转接周期过短并不能有效减轻褐变的发生,25天为继代转接的最佳周期。4.影响曼地亚红豆杉丛生芽继代增殖倍数和芽长的主要因素是6-BA、TDZ、NAA、水解乳蛋白、碳源和琼脂用量。其中细胞分裂素6-BA以0.15 mg-L-1、生长素NAA以1.0 mg-L-1有利于丛生芽的增殖。曼地亚红豆杉丛生芽继代增殖最适宜培养基配方是MS+6-BA 0.15 mg-L-1+TDZ 0.01 mg-L-1+NAA 1.0 mg-L-1+AC 0.4 g-L-1+LH 200 mg-L-1+食糖30 g-L-1+琼脂8g-L-1,pH 5.8。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-9
1 文献综述  9-16
  1.1 红豆杉简介  9-11
    1.1.1 红豆杉的资源分布  9
    1.1.2 红豆杉的形态特征和生物学特性  9-10
    1.1.3 红豆杉的药用价值  10
    1.1.4 红豆杉的经济价值和观赏价值  10
    1.1.5 曼地亚红豆杉简介  10-11
  1.2 红豆杉组织培养的研究概况  11-14
    1.2.1 培养基  11-12
    1.2.2 外植体  12
    1.2.3 外源植物激素  12-13
    1.2.4 褐变问题  13-14
  1.3 曼地亚红豆杉的繁殖方式及其研究现状  14-16
2 引言  16-17
3 试验材料与研究方法  17-23
  3.1 供试材料  17
  3.2 技术路线  17
  3.3 培养条件和培养基  17
  3.4 初代培养试验设计方案  17-19
    3.4.1 外植体最佳灭菌措施筛选试验  17-18
    3.4.2 外源植物激素及基本培养基对腋芽诱导影响的试验  18-19
  3.5 影响红豆杉外植体褐变因素的研究  19-20
    3.5.1 预处理对外植体褐变影响的试验  19
    3.5.2 AC 对外植体褐变影响的试验  19
    3.5.3 PVP 对外植体褐变影响的试验  19
    3.5.4 VC 对外植体褐变影响的试验  19-20
    3.5.5 碳源对外植体褐变影响的试验  20
    3.5.6 继代时间对外植体褐变影响的试验  20
  3.6 丛生芽继代增殖试验  20-22
    3.6.1 外源植物激素对丛生芽继代增殖影响的试验  20-21
    3.6.2 碳源对丛生芽继代增殖影响的试验  21
    3.6.3 水解乳蛋白对丛生芽继代增殖影响的试验  21
    3.6.4 琼脂浓度对丛生芽继代增殖影响的试验  21-22
  3.7 数据统计方法与分析工具  22-23
4 结果与分析  23-43
  4.1 初代培养试验结果与分析  23-28
    4.1.1 外植体无菌培养体系的建立  23
    4.1.2 基本培养基及外源植物激素对腋芽诱导的影响  23-28
  4.2 红豆杉外植体褐变影响因素的研究  28-34
    4.2.1 不同预处理措施对褐变的影响  28
    4.2.2 活性炭浓度对褐变的影响  28-29
    4.2.3 PVP 对褐变的影响  29-30
    4.2.4 VC 浓度对褐变的影响  30-31
    4.2.5 碳源对褐变的影响  31-33
    4.2.6 继代时间对褐变的影响  33-34
  4.3 丛生芽继代增殖培养试验结果与分析  34-43
    4.3.1 外源植物激素对丛生芽继代增殖及生长的影响  34-37
    4.3.2 碳源对丛生芽继代增殖及生长的影响  37-39
    4.3.3 水解乳蛋白浓度对丛生芽继代增殖及生长的影响  39-40
    4.3.4 琼脂浓度对丛生芽继代增殖及生长的影响  40-43
5 结论与讨论  43-47
  5.1 结论  43-44
    5.1.1 红豆杉组织培养条件  43
    5.1.2 外植体的选取  43
    5.1.3 外植体无菌培养体系的建立  43
    5.1.4 腋芽诱导的最佳培养基  43
    5.1.5 抑制曼地亚红豆杉外植体褐变的最佳措施  43
    5.1.6 丛生芽继代增殖培养的最佳培养基配方  43-44
  5.2 讨论  44-47
    5.2.1 外植体的选择和消毒  44
    5.2.2 褐变问题  44-45
    5.2.3 曼地亚红豆杉试管苗的增殖培养  45-46
    5.2.4 后续的工作计划  46-47
参考文献  47-51
致谢  51-52
作者简介  52-53
附图  53-55
附表  55-57

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中图分类: > 农业科学 > 林业 > 森林树种 > 针叶树类 > 红豆杉、紫杉
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