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产共轭亚油酸瘤胃细菌的筛选与鉴定

作　者: 黄翠丽
导　师: 陈强；高俊莲
学　校: 四川农业大学
专　业: 土壤学
关键词: 瘤胃细菌 共轭亚油酸 气相色谱 16S rDNA序列 脂肪酸
分类号: S852.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 35次
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内容摘要


本研究通过亨盖特厌氧操作方法从反刍动物牛、羊的瘤胃内容物中分离瘤胃细菌,采用紫外光谱法和气相色谱结合法,从分离出的瘤胃细菌中筛选产cis9,trans11-CLA和trans 10, cis12-CLA这两种具有生理活性共轭亚油酸异构体的菌株；并通过形态特征观察、16S rDNA序列分析、脂肪酸组成分析以及生理生化特征测定,对筛选出的菌株进行分类鉴定。研究结果如下：(1).从中国农业大学动物科技学院养殖实验基地和内蒙古鄂尔多斯采集9个瘤胃内容物样品,通过亨盖特厌氧操作方法分离瘤胃细菌,经滚管培养得到58株瘤胃细菌纯培养。这58株瘤胃细菌的菌落颜色以白色为主,少数为黄色；菌落大小均较小,菌落直径为1-5mm；菌落形状以光滑的圆形为主,少数为不规则形状。(2).采用紫外光谱法初筛,从分离到的58株瘤胃细菌中筛选到8株具有产共轭亚油酸的能力的菌株。其中有4株在波长为232nm的紫外区有吸收峰,3株在233nm处有吸收峰,另外1株的吸收峰在234nm处。8个菌株吸收峰的OD值为0.4-0.9,最高的是菌株7512,吸收峰的OD值为0.8086。(3).运用气相色谱法复筛,从紫外分光光度法筛选出的8株瘤胃细菌中筛选产cis9,trans11-CLA和trans 10, cis12-CLA这两种具有生理活性共轭亚油酸异构体的菌株。实验结果显示,8株瘤胃细菌有具有产cis9, trans11-CLA和trans10, cis12-CLA的能力,产量最高的是菌株111,cis9, trans11-CLA和trans 10, cis12-CLA产量分别为141.7μg/mL和127.5μg/mL。(4).在MRS固体培养基上观察了8株产共轭亚油酸瘤胃细菌的菌落形态特征,并进行细胞革兰氏染色,电子显微镜扫描观察细胞形态特征。实验结果显示,8株产共轭亚油酸瘤胃细菌都为革兰氏阳性,菌落颜色均为白色；菌落形状多为圆形,少数为不规则形状；菌落边缘以整齐光滑居多,少数呈波浪状；菌落直径为1-5mm；8个菌株的细胞形态均为球状,菌体直径为0.5-1.0μm。(5).根据16S rDNA序列分析、脂肪酸组成分析以及生理生化特征测定结果,初步确定筛选出的8株产CLA瘤胃细菌均为婴儿链球菌(Streptococcus infantarius)。

全文目录


摘要  4-5
ABSTRACT  5-10
1 文献综述  10-19
  1.1 瘤胃细菌  10
  1.2 共轭亚油酸  10-12
    1.2.1 共轭亚油酸的结构与功能  10-11
    1.2.2 共轭亚油酸的来源  11-12
    1.2.3 共轭亚油酸的分析检测方法  12
  1.3 微生物合成共轭亚油酸研究进展  12-18
    1.3.1 国外研究进展  12-15
    1.3.2 国内研究进展  15-18
  1.4 本研究的目的意义  18-19
2 产共轭亚油酸瘤胃细菌的筛选  19-31
  2.1 实验材料  19-22
    2.1.1 实验样品  19-20
    2.1.2 实验仪器  20
    2.1.3 主要试剂及配制  20-21
    2.1.4 培养基  21-22
  2.2 实验方法  22-25
    2.2.1 瘤胃样品的采集与处理  22
    2.2.2 瘤胃细菌的分离纯化  22-23
    2.2.3 紫外光谱法初筛  23-24
    2.2.4 气相色谱法复筛  24-25
  2.3 结果与分析  25-30
    2.3.1 瘤胃细菌的分离纯化结果  25-26
    2.3.2 紫外光谱法初筛结果  26-27
    2.3.3 气相色谱法复筛结果  27-30
  2.4 小结  30-31
3 产共轭亚油酸瘤胃细菌的鉴定  31-50
  3.1 实验材料  31-34
    3.1.1 供试菌株  31
    3.1.2 实验仪器  31-32
    3.1.3 主要试剂及配制  32-33
      3.1.3.1 主要试剂  32
      3.1.3.2 试剂配制  32-33
    3.1.4 培养基  33-34
  3.2 实验方法  34-42
    3.2.1 形态特征观察  34
      3.2.1.1 菌落形态特征观察  34
      3.2.1.2 革兰氏染色观察  34
      3.2.1.3 细胞形态特征观察  34
    3.2.2 16S RDNA序列分析  34-41
      3.2.2.1 总DNA提取  35-36
      3.2.2.2 16S rDNA PCR扩增  36-37
      3.2.2.3 PCR产物回收  37
      3.2.2.4 16S rDNA片段的克隆及酶切验证  37-41
      3.2.2.5 16S rDNA序列分析  41
    3.2.3 脂肪酸组成分析  41-42
    3.2.4 生理生化特征测定  42
  3.3 结果与分析  42-49
    3.3.1 形态特征观察结果  42-44
      3.3.1.1 菌落形态特征  42-43
      3.3.1.2 革兰氏染色  43
      3.3.1.3 细胞形态特征观察  43-44
    3.3.2 16S RDNA序列分析  44-47
      3.3.2.1 16S rDNA PCR扩增  44
      3.3.2.2 PCR产物回收  44-45
      3.3.2.3 16S rDNA片段的克隆及酶切验证  45-46
      3.3.2.4 16S rDNA序列分析  46-47
    3.3.3 脂肪酸组成分析结果  47-49
    3.3.4 生理生化特征测定结果  49
  3.4 小结  49-50
4 结论与讨论  50-54
  4.1 结论  50-51
  4.2 讨论  51-53
  4.3 需要进一步完善的地方  53-54
参考文献  54-60
致谢  60

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医基础科学 > 家畜微生物学（兽医病原微生物学）
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