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贝伐单抗对缺氧Müller细胞上水通道蛋白4表达的影响
作 者: 蔡维
导 师: 程扬
学 校: 华中科技大学
专 业: 眼科学
关键词: 贝伐单抗 水通道蛋白4 Müller细胞 视网膜水肿 缺氧
分类号: R774.1
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 17次
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内容摘要
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目的通过体外培养的人视网膜Müller细胞,研究贝伐单抗(Bevacizumab)对氯化钴(CoCl2)诱导的缺氧人视网膜Müller细胞上水通道蛋白4(Aquaporin-4)表达的影响,探讨贝伐单抗在治疗视网膜水肿中的相关作用机制。方法采用酶消化法来培养人视网膜Müller细胞,通过电镜、细胞免疫荧光染色和形态观察进行Müller细胞的鉴定。通过半定量RT-PCR检测500μmol/L氯化钴(CoCl2)分别作用0h,6h,12h,24h及浓度分别为0μmol/L,100μmol /L,300μmol /L,500μmol/L,700μmol/L的CoCl2作用24h后,Müller细胞上AQP4mRNA和VEGFmRNA的表达,构建CoCl2诱导的Müller细胞缺氧模型。用半定量RT-PCR检测50ng/ml外源性血管内皮生长因子(VEGF)分别作用0h, 12h, 24h及浓度分别为0 ng/ml,25ng/ml,50ng/ml,75ng/ml的VEGF作用24h后,Müller细胞上AQP4mRNA的表达,了解VEGF对人视网膜Müller细胞上AQP4的影响。用半定量RT-PCR检测200μg/ml Avastin干预下CoCl2诱导的缺氧人视网膜Müller细胞上AQP4mRNA的表达水平。结果经过电镜、细胞免疫荧光染色和细胞形态的鉴定,本次实验成功培养出人的视网膜Müller细胞。RT-PCR结果显示: CoCl2诱导的Müller细胞缺氧可导致AQP4mRNA和VEGFmRNA的表达上调。随着缺氧时间的延长,VEGFmRNA和AQP4mRNA表达逐渐增强,二者的变化趋势呈正相关(r=0.952, p<0.05)。随着缺氧程度的加重,二者的增加趋势亦呈正相关(r=0.954,p<0.05)。在VEGF作用下, Müller细胞上AQP4mRNA的表达上调(p<0.01),并随着VEGF作用的时间和浓度的增加呈上升趋势。CoCl2诱导的Müller细胞缺氧,在贝伐单抗干预下,Müller细胞上AQP4mRNA的表达降低,表达下降水平和未干预组相比差异有显著意义(p<0.01)。结论体外正常生长状态下的人视网膜Müller细胞表达AQP4及VEGF,CoCl2诱导的缺氧可以增加Müller细胞上AQP4和VEGF的表达。VEGF可以上调Müller细胞AQP4的表达。贝伐单抗通过抑制VEGF,能够降低Müller细胞缺氧时AQP4的表达水平。
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全文目录
中英词汇对照表 5-7 中文摘要 7-9 Abstract 9-11 背景与前言 11-13 第一部分 视网膜Müller细胞的培养及鉴定 13-20 材料与方法 13-16 实验结果 16-18 小结 18-20 第二部分 缺氧对Müller细胞表达的水通道蛋白4及血管内皮生长因子的影响 20-29 材料和方法 20-24 实验结果 24-27 小结 27-29 第三部分 贝伐单抗对缺氧Müller 细胞上水通道蛋白4 表达的影响 29-37 材料和方法 29-31 实验结果 31-35 讨论 35-37 参考文献 37-40 综述 水通道蛋白4与视网膜水肿的研究进展 40-50 参考文献 46-50 致谢 50
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中图分类: > 医药、卫生 > 眼科学 > 视网膜及视神经疾病 > 视网膜疾病
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