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脂筏—依赖性受体DCC信号在Netrin-1调节肝癌细胞极性中的作用研究

作　者: 林海华
导　师: 田德安
学　校: 华中科技大学
专　业: 内科学
关键词: 肝癌 Netrin-1 细胞极性 脂筏 DCC
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


背景和目的癌细胞的显著标志之一是细胞极性的改变,后者在很多生物学过程中发挥关键的作用。在肿瘤的转移过程中,癌细胞主要通过上皮间质转化(EMT)获得迁移、侵袭能力,细胞极性的丢失是EMT的启动阶段,但具体的机制仍不清楚。Netrin-1是层黏连蛋白相关的分泌蛋白,它在调节神经轴突生长、白细胞迁移的过程中发挥重要作用;同时,它还参与调控肿瘤细胞侵袭和转移能力。但其机制仍未完全明确。本项目旨在研究Netrin-1对肝癌细胞极性的作用,以及脂筏–依赖受体DCC在肝癌细胞极性中的调控机制。方法建立肝癌细胞物理缺氧模型,倒置显微镜下观察细胞形态的改变,激光共聚焦检测细胞极性的变化,检测shRNA干扰Netrin-1的表达对缺氧所致细胞极性改变的影响。转染Netrin-1质粒到肝癌细胞HepG2后,建立稳定表达Netrin-1的细胞株,激光共聚焦观察Netrin-1和其受体DCC在脂筏上的聚集及其对肝癌细胞极性的影响,用western-blot检测细胞极性改变后下游极性蛋白Cdc42、Rac-1表达的改变,同时免疫荧光观测细胞骨架的重排。用甲基-β-环糊精(MCD)破坏脂筏的完整性,观测其对缺氧及Netrin-1对肝癌细胞极性的影响及上皮标志蛋白E-钙粘素表达的变化。结果在缺氧培养条件下,肝癌细胞失去相互间的紧密连接,细胞分散,由上皮样转变为狭长的间质样,细胞极性丧失。在缺氧条件下shRNA干扰Netrin-1的表达后可以抑制细胞极性的改变。转染Netrin-1质粒后的HepG2细胞极性丧失,下游极性蛋白Cdc42、Rac-1表达增加,细胞骨架重排。激光共聚焦检测观察到Netrin-1的受体DCC和脂筏共定位于细胞膜上。用甲基-β-环糊精(MCD)破坏脂筏的完整性后,可以抑制Netrin-1对细胞极性的影响,同时上皮标志蛋白E-钙粘素表达增加。结论缺氧条件和Netrin-1可以促进肝癌细胞极性的丧失,抑制Netrin-1的表达后可以抑制肝癌细胞极性发生改变,Netrin-1作用的信号可能是通过脂筏-依赖性受体DCC平台传递。这为进一步探索细胞极性的丢失改变在肝癌早期转移的分子机制提供了重要的理论依据。

全文目录


英文缩略词表  6-8
中文摘要  8-10
ABSTRACT  10-13
前言  13-15
材料与方法  15-31
  一. 实验材料  15-21
  二. 实验方法  21-30
  三. 统计分析  30-31
结果  31-34
  一. 缺氧对肝癌细胞形态的影响  31
  二. Netrin-1 在缺氧肝癌细胞株中的表达  31
  三. 缺氧条件下肝癌细胞极性的检测  31
  四. 缺氧条件下 shRNA 干扰 Netrin-1 的表达对细胞极性的影响  31-32
  五. 肝癌 HepG2 细胞转染 Netrin-1 真核质粒后细胞形态及细胞极性的变化  32
  六. 转染Netrin-1真核质粒的肝癌细胞极性改变后其细胞形态的改变  32
  七. 肝癌细胞极性改变后伴随细胞骨架的变化  32-33
  八. 肝癌细胞极性改变后下游极性蛋白的改变  33
  九. Netrin-1的依赖性受体DCC及脂筏的定位  33
  十. 甲基-β-环糊精(MCD)破坏脂筏后pcDNA3-Netrin-1-HepG2细胞形态的 改变及上皮标志蛋白E-钙粘素的表达变化  33
  十一. 甲基-β-环糊精(MCD)破坏脂筏后对Netrin-1调节肝癌细胞极性的影响  33-34
附图  34-41
讨论  41-45
参考文献  45-47
综述  47-58
  参考文献  54-58
致谢  58

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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