学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

缺氧诱导因子-1α在皮肤鳞状细胞癌中的表达及促进细胞增殖作用

作　者: 徐广芬
导　师: 陶娟；涂亚庭
学　校: 华中科技大学
专　业: 皮肤性病学
关键词: 缺氧诱导因子-1α 血管内皮生长因子基因干扰鳞状细胞癌
分类号: R739.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 16次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的:研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)在鳞状细胞癌细胞中的表达情况,及基因干扰HIF-1α后对鳞状细胞癌细胞的影响。方法:应用逆转录PCR( RT-PCR)、蛋白免疫印记(Western Blot)技术比较鳞状细胞癌细胞系(A431细胞)和永生化角质细胞系(hacat细胞)mRNA和蛋白水平表达;及基因敲除HIF-1α基因后HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白表达情况;应用流式细胞仪技术和CCK8细胞增殖检测法检测基因敲除HIF-1α基因后A431细胞凋亡和增殖情况。结果:RT-PCR技术检测A431细胞与hacat细胞相比HIF-1α、VEGF mRNA表达增加(P< 0.05),敲除HIF-1α基因的A431细胞与未敲除HIF-1α基因的A431细胞相比HIF-1α、VEGF mRNA表达降低(P< 0.05);Western Blot技术检测A431细胞与hacat细胞相比蛋白表达增加(P< 0.05),敲除HIF-1α基因的A431细胞与未敲除HIF-1α基因的A431细胞相比HIF-1α、VEGF蛋白表达降低(P< 0.05);流式细胞仪技术检测敲除HIF-1α基因的A431细胞与未敲除HIF-1α基因的A431细胞相比,凋亡细胞数增加、凋亡细胞比例增高且差异性有意义(P< 0.05);CCK8细胞增殖检测法检测敲除HIF-1α基因的A431细胞与未敲除HIF-1α基因的A431细胞相比,细胞增殖速度慢,存在差异性表达(P< 0.05)。结论:HIF-1α、VEGF在鳞状细胞癌细胞系A431中的表达明显高于永生化的角质细胞系hacat细胞中的表达。敲除HIF-1α基因后,A431细胞中HIF-1α、VEGF的表达均下降,且凋亡细胞数增加,增殖速度降低。这些均可说明基因敲出HIF-1α后,可抑制VEGF的表达和功能,抑制鳞癌细胞的增殖并促进其凋亡,表明HIF-1α基因靶向治疗可做为治疗鳞状细胞癌的新型手段之一。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
英文缩略语  8-10
前言  10-12
第一部分HIF-1α在皮肤鳞状细胞癌细胞中的表达  12-25
  1 材料和方法  12-22
    1.1 细胞株  12
    1.2 仪器设备  12-13
    1.3 主要试剂的配制  13-15
    1.4 实验步骤  15-21
    1.5 统计分析  21-22
  2 实验结果  22-24
    2.1 HIF-1α、VEGF m RNA 在A431 细胞和hacat 细胞中的表达  22
    2.2 HIF-1α、VEGF 蛋白在A431 细胞和hacat 细胞中的表达  22-24
  3 小结  24-25
第二部分HIF-1α-siRNA对A431 细胞增殖、凋亡的影响  25-38
  1 材料和方法  25-29
    1.1 细胞株来源  25
    1.2 仪器设备  25-26
    1.3 试剂来源和配制  26
    1.4 实验方法  26-28
    1.5 统计分析  28-29
  2 实验结果  29-37
    2.1 筛选有效的siRNA 组成siRNA pool  29-33
    2.2 转染HIF-1α-siRNA pool 后，A431 细胞形态学改变  33-34
    2.3 转染HIF-1α-siRNA pool 后，A431 细胞增殖情况  34-35
    2.4 转染HIF-1α-siRNA pool 后，A431 细胞凋亡情况  35-37
  3 小结  37-38
讨论  38-41
参考文献  41-45
综述  45-55
  参考文献  51-55
致谢  55

缺氧诱导因子-1α在皮肤鳞状细胞癌中的表达及促进细胞增殖作用

内容摘要

全文目录

相似论文