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迟钝爱德华氏菌EIB202 Sigma（54）编码基因rpoN的敲除及功能研究

作　者: 王克平
导　师: 张惠展
学　校: 华东理工大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 迟钝爱德华氏菌 rpoN 生物被膜 毒力
分类号: Q933
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


迟钝爱德华氏菌EIB202是一类高毒力革兰氏阴性病原菌,同时它是一种人畜共患机会致病菌,能够引起鱼类溃疡病,给海洋水产养殖造成了极大的损失。RpoN是σ54家族的唯一成员,在很多菌属中它是一系列毒力、压力相关基因的重要调控者,同时其在氮源调控方面的重要作用一直被人们所重视。然而,如此一个重要的σ因子在迟钝爱德华氏菌中的研究目前还是空白,本课题首次在迟钝爱德华氏菌中对σ54编码基因rpoN进行了敲除,并做了相关功能研究。本课题利用自杀质粒系统对迟钝爱德华氏菌rpoN进行了框内506 bp缺失,通过逆转录PCR和实时荧光定量PCR技术证明序列缺失未对上下游基因造成转录水平上的影响。相对于野生株以及回补株,rpoN框内部分缺失株在高渗条件、氧化耐受、酸性条件的生存以及在LB培养基中的生长状况都受到了影响,表明RpoN是重要的压力调控因子以及氮源调控因子。另外,rpoN缺失之后显著降低了迟钝爱德华氏菌的生物被膜合成能力以及硫酸软骨素酶活性,同时,对模式生物斑马鱼的半数致死量以及感染周期都有不同程度的增加,表明RpoN是重要的毒力调控因子。实时荧光定量PCR数据表明由于rpoN的缺失对σ70家族成员在转录水平上造成了不同程度的影响,特别是rpoS和fliA,较野生株在稳定期分别下调了4.1倍和7.9倍。最后,通过针对野生株与敲除株的差异显示PCR技术,筛选到了两个差异基因,分别为anuA和flhC。

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中图分类: > 生物科学 > 微生物学 > 微生物遗传学
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