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结核分枝杆菌MPT64基因重组腺病毒疫苗的免疫原性及其保护效力研究

作　者: 李玮
导　师: 胡成平
学　校: 中南大学
专　业: 呼吸内科
关键词: 结核分枝杆菌 MPT64基因重组腺病毒免疫原性保护效力
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 62次
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内容摘要

目的：探讨结核分枝杆菌 MPT64基因重组腺病毒疫苗的免疫原性及其对结核分支杆菌感染的免疫保护作用,为研究新的结核疫苗提供理论依据。方法：将50只雌性C57BL/6小鼠随机分为5组(A为阴性对照组或正常组、B为阳性对照组或模型组、C为腺病毒载体组、D为实验疫苗组、E为卡介苗组),各组10只,每组再分为免疫原性组4只,保护效力组6只。分别将生理盐水(A、B组)、空腺病毒载体(C组)、结核分枝杆菌MPT64基因重组腺病毒疫苗(D组)、卡介苗(E组)免疫各组小鼠,4周后无菌取免疫原性组小鼠脾脏,研磨匀浆培养,取脾淋巴细胞培养上清液用ELISA法检测细胞因子(IFN-γ、IL-4)；用MTT法检测淋巴细胞增值活性。保护效力组小鼠除A组予生理盐水外均予5×106CFU结核分枝杆菌H37Rv标准毒力株经尾静脉攻毒,4周后,称取左肺及脾脏湿重计算脏器指数,并行组织病理检查及肺结核菌培养行菌落计数。结果：①ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清液中细胞因子,D组IFN-γ显著高于A、B、C组,比较差异有统计学意义,与E组比较差异无统计学意义；②IL-4水平5组均较低,各组间差异无统计学意义；③MTT法检测脾淋巴细胞增殖实验结果显示,D组的刺激指数最高,与A、B、C比较,差异有统计学意义,与E组差异无统计学意义；④大体病理结果显示D组和E组肺组织和脾组织病变明显较B、C组轻。⑤肺组织匀浆液结核菌菌落计数A组无菌生长,E组菌落数最少,其次是D组；D组与B、C组间差异有统计学意义,与E组间差异无统计学意义。结论：初步实验表明：①结核分枝杆菌MPT64基因重组腺病毒疫苗具有较强的免疫原性,在小鼠体内能够诱导较强的细胞免疫应答,诱导的IFN-γ与BCG相比无明显差异,表明该疫苗免疫效果较好；②结核分枝杆菌MPT64基因重组腺病毒疫苗能增强小鼠对结核分枝杆菌感染的保护作用,其保护作用与卡介苗效果相当。

全文目录

中文摘要  4-5
英文摘要  5-9
英文缩略词表  9-11
第一章前言  11-13
第二章材料与方法  13-18
  2.1 材料  13-14
    2.1.1 菌株、细胞株和实验疫苗来源  13
    2.1.2 实验动物  13
    2.1.3 主要试剂  13
    2.1.4 实验主要器材  13-14
  2.2 方法  14-17
    2.2.1 细胞的培养  14-15
    2.2.2 重组腺病毒载体和结核分枝杆菌MPT46基因重组腺病毒疫苗的扩增  15
    2.2.3 免疫小鼠  15
    2.2.4 小鼠脾淋巴细胞的制备  15-16
    2.2.5 MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖活性  16
    2.2.6 ELISA方法检测脾淋巴细胞培养上清液细胞因子  16
    2.2.7 结核分枝杆菌(H37Rv 标准毒力株)攻击  16
    2.2.8 小鼠脏器指数测定  16
    2.2.9 小鼠脏器病理改变及抗酸染色  16
    2.2.10 结核分枝杆菌培养  16-17
  2.3 统计学处理  17-18
第三章结果  18-23
  3.1 小鼠脾淋巴细胞培养上清中细胞因子的检测  18-19
  3.2 对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响  19
  3.3 对小鼠免疫脏器指数的影响  19-20
  3.4 小鼠肺和脾组织病理切片观察组织病理改变  20-22
  3.5 肺组织匀浆液培养结核菌菌落计数  22-23
第四章讨论  23-26
第五章结论  26-27
参考文献  27-30
综述  30-44
致谢  44-45
攻读学位期间发表的论文  45

结核分枝杆菌MPT64基因重组腺病毒疫苗的免疫原性及其保护效力研究

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