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半胱天冬氨酸蛋白酶抑制剂对胰岛细胞的保护

作　者: 李旺
导　师: 王维
学　校: 中南大学
专　业: 影像医学与核医学
关键词: Caspase抑制剂胰岛细胞细胞移植
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 28次
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内容摘要

目的探索半胱天冬氨酸蛋白酶抑制剂在胰岛分离、纯化及培养过程中对胰岛细胞的保护作用。方法实验分为实验组及对照组,每组各用新生猪5只,实验组在胰岛分离纯化过程中加入caspase抑制剂(Z-VAD-FMK,浓度为20um/dl)进行处理后收集胰岛,于第2、4、6天换液培养,每次换液培养基内加入(Z-VAD-FMK,浓度为20um/dl),对照组不加caspase抑制剂Z-VAD-FMK处理,同样条件下分离纯化及培养,两组细胞培养至第7天分别进行以下检测：应用caspase-3活性检测试剂盒对胰岛凋亡的效应酶caspase-3活性进行检测；应用RT-PCR检测bcl-2及p53基因表达情况；流式细胞仪检测胰岛凋亡率；通过葡萄糖静态反应培养方法进行胰岛素释放试验。结果通过对Caspase3活性的检测,结果显示,实验组Caspase3活性稳定在低水平,而对照组Caspase3的活性明显升高(P<0.001); RT-PCR检测bcl-2和P53基因,结果表明实验组较对照组bcl-2表达增强,而p53表达减弱；应用流式细胞仪检测胰岛细胞凋亡率,实验组细胞凋亡率较对照组明显降低(P<0.001)；通过葡萄糖刺激胰岛素释放实验,对胰岛分泌功能的检测,得出结果,实验组与对照组胰岛分泌功能无明显差异。结论半光天冬氨酸蛋白酶抑制剂(Z-VAD-FMK:浓度为20um/dl)对体外培养的胰岛细胞具有显著抗凋亡作用,能够Bcl-2基因的表达增强,而P53基因的表达减弱,对胰岛分泌功能无明显影响,继而保护胰岛细胞,从而使获得具有正常功能胰岛的数量大大增加,为胰岛移植治疗糖尿病的效果奠定基础性保障。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-9
中英文缩略词  9-10
第一章前言  10-12
第二章实验材料  12-14
  2.1 实验动物  12
  2.2 实验仪器  12
  2.3 实验试剂  12-14
第三章实验方法  14-20
  3.1 胰岛细胞分离纯化  14
  3.2 半胱天冬氨酸蛋白酶抑制剂(Z-VAD-FMK)的用法  14
  3.3 Caspase3活性检测  14-15
  3.4 RT-PCR检测胰岛细胞中p53、Bcl-2 mRNA的表达  15-19
  3.5 流式细胞仪检测细胞凋亡  19
  3.6 胰岛功能的测定  19-20
第四章结果  20-24
  4.1 Caspase3活性的变化  20
  4.2 RT-PCR检测胰岛细胞中p53、Bcl-2 mRNA的表达  20-21
  4.3 流式细胞仪检测细胞凋亡情况  21-22
  4.4 胰岛素释放实验结果  22-24
第五章讨论  24-29
第六章结论  29-30
参考文献  30-34
综述  34-46
致谢  46-47
攻读学位期间发表论文情况  47

半胱天冬氨酸蛋白酶抑制剂对胰岛细胞的保护

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