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山东青岛地区宫颈病变组织中HPV16 URR和E6基因突变分析

作　者: 赵成琳
导　师: 王言奎
学　校: 青岛大学
专　业: 妇产科学
关键词: 宫颈肿瘤 人乳头状瘤病毒 URR E6 基因突变
分类号: R737.33
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的分析山东省青岛地区妇女不同宫颈病变组织中人乳头瘤病毒16型(HPV16)上游调控区(URR)和E6基因序列多态性,以及序列变异与宫颈病变的相关性。材料与方法[1]2007年8月至2010年7月间自青岛大学医学院附属医院收集宫颈病变标本共374例,其中120例为该院妇产科住院病人手术切除宫颈癌组织,病理诊断107例为宫颈鳞状上皮癌,10例为宫颈腺癌,3例为宫颈腺鳞癌。254例标本是选取门诊病人宫颈液基细胞学涂片异常的宫颈活检标本,其中50例病理诊断为宫颈上皮内瘤变Ⅲ级(Cervical intraepithelial neoplasia, CIN),32例病理诊断为宫颈上皮内瘤变Ⅱ级。[2]采用蛋白酶K法提取新鲜组织标本DNA。[3]以提取的DNA为模板,采用聚合酶链反应(PCR)技术,以通用引物(MY09/11)筛选出感染高危型HPV的宫颈组织标本,然后用HPV16型特异性引物筛选出HPV16阳性标本[4]以HPV16阳性标本DNA为模板,扩增URR和E6基因全序列,将所获得PCR基因产物进行纯化后测序,与德国HPV标准株进行比对分析,寻找HPV16URR和E6的突变位点。结果[1]宫颈癌组、CINⅢ组和CINⅡ组HPV16感染率分别为60.00%(72/120)、43.10%(50/116)和23.19%(32/138),差异有统计学意义(P=0.000)。[2]URR测序结果发现了19个突变位点,所有标本在7521位点均发生了G?A突变；64.22%(70/109)标本中检测到24,7730和7842的联合突变,为另一突变热点。E6测序结果共发现17个突变位点,突变热点为178位点(D25E),其在宫颈癌组、CINⅢ组和CINⅡ组的比例分别为61.11%(44/72)、62.00%(31/50)和50.00%(16/32),三组之间差别无统计学意义(P=0.499)。仅观察到6例350位点突变(L83V)。AS是最多见的突变类型,在154例HPV16阳性标本中占59.09%,其次为E-P原型33.12%。结论[1]HPV16感染与宫颈癌的发生发展密切相关。[2]青岛地区妇女宫颈病变组织中HPV16 URR突变热点为nt7521以及nt24,7830和7842的联合突变。HPV16 E6突变热点为nt178。[3]AS和原型是青岛地区宫颈病变组织中两种主要的HPV16分支。

全文目录


摘要  2-4
Abstract  4-8
引言  8-9
第1章 材料和方法  9-15
  1.1 材料  9-10
    1.1.1 主要仪器  9
    1.1.2 主要试剂  9
    1.1.3 实验组织标本  9-10
    1.1.4 阳性对照细胞  10
  1.2 实验方法  10-15
    1.2.1 实验标本DNA的提取及溶解  10-12
    1.2.2 聚合酶链反应PCR  12-13
    1.2.3 实验步骤  13
    1.2.4 扩增核酸产物电泳分析  13-14
    1.2.5 目的基因测序及分析  14
    1.2.6 统计学分析  14-15
第2章 结果  15-21
  2.1 实验标本中HPV16的扩增结果  15
  2.2 HPV16阳性标本中URR、E6的的扩增结果  15-16
  2.3 DNA测序结果  16-21
    2.3.1 HPV16 URR的测序结果  16-17
    2.3.2 HPV16 E6的测序结果  17-21
第3章 讨论  21-24
  3.1 HPVURR,E6基因的结构和功能  21-22
  3.2 HPV16 URR,E6的突变情况  22-24
结论  24-25
参考文献  25-28
综述  28-40
  参考文献  35-40
攻读学位期间的研究成果  40-41
附录  41-42
致谢  42-43

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 女性生殖器肿瘤 > 子宫肿瘤
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