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糖基转移酶β3GnT2、β3GnT8真核表达载体和β3GnT8 RNA干扰细胞株SGC-7901的构建及β3GnT8对相关基因mRNA表达的影响

作　者: 赵善成
导　师: 吴士良
学　校: 苏州大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: β3GnT2 β3GnT8 RNA干扰基质金属蛋白酶真核表达载体 SNP
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的构建β3GnT8 RNA干扰细胞株探讨β3GnT8对于β3GnT2、MMP2、TIMP2基因mRNA表达水平的影响以及检测β3GnT2和β3GnT8在胃癌、恶性脑胶质瘤、乳腺癌癌细胞株中表达水平并构建其真核细胞表达载体。方法RT-PCR法检测β3GnT2、β3GnT8在上述三类癌细胞株中的表达;将β3GnT8 RNA干扰载体pSilenCircle-T8Si及对照载体转染胃癌细胞株SGC-7901,G418筛选稳定转染细胞株,RT-PCR检测β3GnT8、β3GnT2、MMP2、TIMP2 m RNA水平的表达,Western blot检测各组细胞中β3GnT8蛋白表达水平; PCR扩增带酶切位点β3GnT2、β3GnT8全长编码片段并构建真核表达载体p EGFP-C1-β3GnT2、pEGFP-C1-β3GnT8。结果β3GnT2、β3GnT8在上述癌细胞株中均有表达,胃癌细胞株中β3GnT8表达稍高;荧光显微镜观察、RT-PCR、Western blot证实成功构建胃癌SGC-7901β3GnT8 RNA干扰下调细胞株,RT-PCR检测β3GnT2表达没有显著变化;带酶切位点β3GnT2、β3GnT8全长编码片段成功扩增并连接至pEGFP-C1载体上。结论β3GnT2、β3GnT8共同表达于多种癌细胞株中,β3GnT8在m RNA水平影响MMP2的表达;成功克隆β3GnT2、β3GnT8全长编码片段并构建真核表达载体p EGFP-C1-β3GnT2、pEGFP-C1-β3GnT8,并构建成功β3GnT8 RNA干扰细胞株SGC-7901,为进一步的功能研究奠定了基础。

全文目录

中文摘要  4-5
Abstract  5-9
前言  9-17
第一部分 β3GnT2、β3GnT8 真核表达载体的构建及胃癌AGS、胶质瘤U251 细胞中β3GnT8 c DNA SNP 的分布  17-27
  1 引言  17
  2 材料和方法  17-22
    2.1 材料  17-19
    2.2 方法  19-22
  3 结果  22-24
    3.1 β3GnT2、β3GnT8 在胃癌、恶性脑胶质瘤、乳腺癌三类癌细胞株中的表达谱分析  22-23
    3.2 重组载体的酶切鉴定、测序鉴定  23-24
    3.3 NCBI 在线软件blastx 分析β3GnT8 克隆片段编码氨基酸的变化  24
  4 讨论  24-25
  5 参考文献  25-27
第二部分 β3GnT8 RNA 干扰胃癌细胞株SGC-7901 的构建及β3GnT8 与相关基因mRNA 表达的变化  27-38
  1 引言  27
  2 材料和方法  27-32
    2.1 材料  27-29
    2.2 方法  29-32
  3 结果  32-35
    3.1 荧光显微镜观察RNA 干扰稳定转染细胞株中GFP 荧光  32-33
    3.2 RT-PCR 检测β3GnT8 RNA 干扰效果及β3GnT2 、MMP2、TIMP2 m RNA 水平的表达变化  33-34
    3.3 Western blot 鉴定β3GnT8 RNA 干扰效果  34-35
  4 讨论  35-36
  5 参考文献  36-38
全文小结  38-39
综述多聚乳糖胺结构与β1,3N-乙酰氨基葡萄糖转移酶家族两个成员β3GnT2、β3GnT8 研究进展  39-50
  参考文献  46-50
攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文  50-51
  在读期间科研成果  50
  本课题所获的基金资助  50-51
缩略词表  51-52
致谢  52-53

糖基转移酶β3GnT2、β3GnT8真核表达载体和β3GnT8 RNA干扰细胞株SGC-7901的构建及β3GnT8对相关基因mRNA表达的影响

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