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副干酪乳杆菌的分离鉴定及免疫功能研究

作　者: 巨晓英
导　师: 寇晓虹
学　校: 天津大学
专　业: 食品科学
关键词: 副干酪乳杆菌 分离筛选 分子鉴定 免疫功能
分类号: TS252.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


副干酪乳杆菌是干酪乳杆菌的一个亚种,常见于健康人体肠道,自然发酵乳制品及其它发酵产品中,该菌种有很强的耐NaCl、耐酸及耐胆汁盐能力,某些菌株还有抗过敏作用,在我国,对其研究较少。本研究拟从传统发酵乳制品中分离筛选优良性状的乳酸菌,通过形态学、生理生化特征、耐受性及分子生物学方法进行系统鉴定,同时进行分离株对小鼠免疫调节作用的研究,为丰富我国益生菌菌株资源及副干酪乳杆菌的研究和应用提供科学依据,奠定理论基础。以民间多种发酵奶制品和保健品为材料,从中分离出31株细菌,其中12株符合乳酸菌的性状。通过菌株对NaCl、酸和胆汁盐的耐受能力,筛选出LP2、LP4和LP9三株优良菌株,经形态学和生理生化鉴定,三株菌与副干酪乳杆菌性状一致。进一步的胃肠道模拟环境耐受性试验表明,菌株LP2和标准菌CICC20241在pH 3.0,0.3%胆汁盐,10 mg/mL胃蛋白酶和10 mg/mL胰蛋白酶环境下处理24h后均保持了90%以上的存活率,耐受性最强。根据GeneBank(FJ607300)发表的Lactobacillus paracasei 16S rDNA基因序列,设计并合成一对特异引物,采用PCR技术扩增出LP2的16S rDNA片段,序列测定与分析结果表明,LP2与GenBank中Lactobacillus paracasei EU676339同源性为99.6%,进一步从分子水平上鉴定了分离菌株LP2为副干酪乳杆菌。对菌株LP2和CICC20241进行了免疫调节功能的研究。选用ICR小鼠分成4批共360只,雌雄各半随机分为对照、低剂量、中剂量和高剂量4个剂量组,其中低、中、高剂量组每天灌喂不同剂量重悬于10%脱脂乳中的LP2和CICC20241,对照组每天灌喂等量的10%脱脂乳,试验周期为3周。结果表明,绵羊红细胞诱导小鼠迟发型变态反应(DTH),中、高剂量组24h足跖增厚均高于对照组,并有显著性差异(P<0.05),中高剂量组之间无显著性差异(P>0.05); LP2中、高剂量组小鼠脾淋巴细胞增殖力均高于对照组,有极显著性差异(P<0.01),高剂量组极显著高于中剂量组(P<0.01),CICC20241高剂量组有显著效果;两菌株处理的小鼠,高剂量组自然杀伤(NK)细胞活性极显著高于其它组(P<0.01),LP2中剂量组显著高于对照组(P<0.05)。LP2和CICC20241均具有较强的免疫调节作用。

全文目录


中文摘要  3-4
ABSTRACT  4-9
第一章 文献综述  9-26
  1.1 益生菌  9-19
    1.1.1 益生菌的概念和种类  9-10
    1.1.2 益生菌的鉴定技术  10-11
    1.1.3 益生菌对免疫功能的调节作用  11-13
    1.1.4 国内外益生菌的生产应用现状  13-19
  1.2 副干酪乳杆菌  19-24
    1.2.1 副干酪乳杆菌的分类鉴定  19-20
    1.2.2 副干酪乳杆菌的功能研究进展  20-21
    1.2.3 副干酪乳杆菌在食品工业中的应用  21-22
    1.2.4 副干酪乳杆菌在其它领域的应用  22-24
  1.3 课题立题依据与研究内容  24-26
第二章 乳酸菌的分离筛选和生理生化鉴定  26-39
  2.1 材料与方法  26-31
    2.1.1 材料  26-28
    2.1.2 方法  28-31
  2.2 结果与分析  31-37
    2.2.1 乳酸菌的分离纯化  31
    2.2.2 乳酸菌的初步筛选  31-33
    2.2.3 优良乳酸菌的生理生化鉴定  33-34
    2.2.4 优良乳酸菌耐胃肠道逆环境的进一步筛选  34-37
  2.3 小结  37-39
第三章 副干酪乳杆菌的分子生物学鉴定  39-48
  3.1 材料与试剂  39-41
    3.1.1 药品试剂  39
    3.1.2 主要仪器设备  39-40
    3.1.3 菌株  40
    3.1.4 主要试剂配制  40-41
  3.2 方法  41-43
    3.2.1 乳酸菌基因组DNA的提取  41
    3.2.2 16S rDNA基因片段的PCR反应  41-42
    3.2.3 琼脂糖凝胶电泳  42
    3.2.4 PCR引物特异性检验  42
    3.2.5 PCR产物的回收及纯化  42-43
    3.2.6 核苷酸序列测定及分析  43
  3.3 结果与分析  43-48
    3.3.1 乳酸菌基因组DNA的提取  43
    3.3.2 PCR扩增16S rDNA基因目的片段  43-44
    3.3.3 引物特异性检验  44
    3.3.4 核苷酸序列分析  44-46
    3.3.5 讨论  46-48
第四章 副干酪乳杆菌的免疫功能研究  48-67
  4.1 试验材料  48-49
    4.1.1 试验动物  48
    4.1.2 药品试剂  48-49
    4.1.3 主要仪器设备  49
    4.1.4 细胞  49
  4.2 试验方法  49-54
    4.2.1 动物分组  49
    4.2.2 菌种制备  49-50
    4.2.3 试剂配制  50-51
    4.2.4 体重增长  51
    4.2.5 胸腺指数和脾脏指数  51
    4.2.6 碳粒廓清试验  51-52
    4.2.7 迟发型变态反应  52
    4.2.8 MTT法淋巴细胞转化试验  52-53
    4.2.9 NK细胞活性测定  53-54
  4.3 结果及讨论  54-66
    4.3.1 体重增长  54-55
    4.3.2 胸腺指数和脾脏指数  55-57
    4.3.3 碳粒廓清试验  57-59
    4.3.4 迟发型变态反应  59-61
    4.3.5 淋巴细胞转化试验  61-63
    4.3.6 NK细胞活性  63-66
  4.4 小结  66-67
第五章 结论与展望  67-69
  5.1 副干酪乳杆菌的分离筛选和生理生化鉴定  67
  5.2 副干酪乳杆菌的分子生物学鉴定  67-68
  5.3 副干酪乳杆菌的免疫功能研究  68
  5.4 展望  68-69
参考文献  69-75
发表论文和科研情况说明  75-76
致谢  76

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中图分类: > 工业技术 > 轻工业、手工业 > 食品工业 > 乳品加工工业 > 基础科学
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