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产琥珀酸放线杆菌的分离鉴定及发酵特性

作　者: 欧海龙
导　师: 夏成
学　校: 黑龙江八一农垦大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 瘤胃细菌 产琥珀酸放线杆菌 挥发性脂肪酸 发酵特性
分类号: Q93
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 7次
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内容摘要


本研究无菌采取健康奶牛瘤胃液,采用产琥珀酸放线杆菌选择培养基,按照厌氧菌分离鉴定的方法,分离、筛选出3株瘤胃厌氧菌,通过形态学观察、生化试验结果和所获得细菌的16S rRNA基因序列的同源性分析,确定所分离的3株菌(分别命名为HL1、HL2、HL3)均为产琥珀酸放线杆菌(Actinobacillus succinogenes)。为了解分离的3株产琥珀酸放线杆菌的产酸性能,取健康牛瘤胃液分为对照组(不添加菌株),添加HL1组(1.50×109个/mL、30mL),添加HL2组(1.05×109个/mL、30mL),添加HL3组(1.76×109个/mL、30mL)进行体外产酸试验。结果显示:pH均呈先下降后上升的趋势,HL1组、HL2组、HL3组均明显低于对照组(p<0.05);HL1组中乙酸、丙酸、丁酸及总VFAs浓度均显著高于对照组、HL2组和HL3组(p<0.05),HL2组中乙酸、丙酸、丁酸及总VFAs浓度均显著的高于对照组(p<0.05),HL3组丙酸和总VFA浓度显著的高于对照组(p<0.05),乙酸和丁酸不显著的高于对照组(p>0.05);HL1组、HL2组、HL3组乳酸浓度明显低于对照组(p<0.05),HL1组明显低于HL2组、HL3组(p<0.05),筛选出产酸能力最强的菌株HL1。为阐明HL1对不同精粗比日粮体外发酵特性,取健康羊瘤胃液,加入HL1菌液(浓度为1.50×109个/mL)及其作用底物2.0g精粗比日粮(T1:粗精比60:40组,T2:粗精比50:50组,T3:粗精比40:60组),于培养瓶内连续发酵,取0、2、4、6、8、10、12、24、36、48h培养液,测定pH值、挥发性脂肪酸(乙酸、丙酸、丁酸)及乳酸含量。结果显示:T1:HL1组与对照组相比,pH显著降低(p<0.05),乙酸、丙酸、丁酸及总VFAs浓度显著升高(p<0.05),乳酸浓度显著下降(p<0.05);T2:HL1组与对照组相比,pH显著降低(p<0.05),乙酸、丁酸及总VFAs浓度未显著升高(p>0.05),丙酸浓度显著升高(p<0.05),乳酸浓度未显著下降(p>0.05);T3:HL1组与对照组相比,pH显著降低(p<0.05),乙酸、丙酸、丁酸及总VFAs浓度显著升高(p<0.05),乳酸浓度显著下降(p<0.05)。为明确HL1在不同精粗比日粮(T1:粗精比60:40组,T2:粗精比50:50组,T3:粗精比40:60)瘤胃内的发酵特性,选取6只内蒙古毛用羯羊,对照组和试验组各3只,对照组注入等量生理盐水,试验组注入产琥珀酸放线杆菌培养液100mL(浓度为1.50×109个/mL),采集0、2、4、6、8、10、12、24h瘤胃液,检测pH、挥发性脂肪酸(乙酸、丙酸、丁酸)、乳酸含量。结果显示:T1:HL1组与对照组相比,pH显著降低(p<0.05),丙酸、丁酸及总VFAs浓度显著升高(p<0.05),乙酸和乳酸浓度无明显变化(p>0.05);T2:HL1组与对照组相比,pH未明显降低(p>0.05),乙酸、丙酸、丁酸及总VFAs浓度显著升高(p<0.05),乳酸浓度显著减少(p<0.05);T3:HL1组与对照组相比,pH显著降低(p<0.05),乙酸、丙酸、丁酸及总VFAs浓度显著升高(p<0.05),乳酸浓度未显著降低(p>0.05)。上述的试验结果表明分离鉴定的HL1菌株具有更强的产酸能力,更适宜在粗精比60:40的条件下生长,不仅可保持pH在6.0~7.0之间波动,利于瘤胃微生物发酵,并且能够充分利用瘤胃内容物来促进乙酸、丙酸等挥发性脂肪酸的生成,降低乳酸的生成,为今后瘤胃微生态制剂的研制奠定了基础。

全文目录


摘要  3-4
Abstract  4-7
第一章 引言  7-18
  1.1 文献综述  7-16
    1.1.1 瘤胃微生态区系  7-10
    1.1.2 产琥珀酸放线杆菌的研究进展  10-13
    1.1.3 直接饲喂微生物（DFM）在反刍动物上的应用  13-16
  1.2 研究的目的和意义  16-17
  1.3 本研究要解决的问题  17-18
第二章 材料与方法  18-25
  2.1 材料  18-21
  2.2 方法  21-25
第三章 试验结果  25-44
  3.1 分离细菌的革兰氏染色结果  25
  3.2 分离细菌的生化反应鉴定结果  25-26
  3.3 细菌16S RDNA PCR 基因扩增产物电泳结果  26
  3.4 菌株16S RDNA PCR 基因序列测定及同源性比较结果  26-28
  3.5 产琥珀酸放线杆菌营养液的OD 值及菌体数  28
  3.6 体外发酵筛选优势菌株  28-31
  3.7 优势菌的耐酸性结果  31-32
  3.8 HL1 菌株对不同精粗比日粮体外发酵的影响  32-37
  3.9 HL1 菌株对不同精粗比日粮瘤胃发酵的影响  37-44
第四章 讨论  44-47
  4.1 产琥珀酸放线杆菌的分离鉴定  44
  4.2 产琥珀酸放线杆菌对瘤胃微生物发酵的影响  44-47
第五章 结论  47-48
参考文献  48-53
致谢  53-54
作者简历  54

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中图分类: > 生物科学 > 微生物学
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