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补阳还五汤及其有效组分对VSMC增殖的影响及细胞周期和MAPK信号转导机制的研究

作　者: 陈刚
导　师: 邓常青
学　校: 湖南中医药大学
专　业: 中西医结合基础
关键词: 补阳还五汤 有效组分 生物碱 苷 血管平滑肌细胞 细胞增殖 血小板衍生生长因子 细胞周期 细胞周期蛋白 增殖细胞核抗原 细胞周期蛋白依赖性激酶 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制物 丝裂素活化蛋白激酶
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的：探讨补阳还五汤及其有效组分生物碱、苷对血小板衍生生长因子BB (PDGF-BB)诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及其细胞周期和丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号转导的机制。方法：以含药血浆(终浓度10%)作用于VSMC,3小时后加入PDGF(终浓度10ng／ml),24小时后以MTT比色法测定生长曲线,以免疫荧光流式细胞分选术(FACS)测定细胞周期,以流式细胞术(FCM)测定细胞周期相关蛋白c-fos、P21、cyclinD1、PCNA和CDK4的表达,以免疫蛋白印迹法(western blot)测定P-ERK1/2、P-JNK1/2和MKP-1的表达。结果：①PDGF-BB作用于VSMC后,可诱导VSMC增殖(P<0.05)。补阳还五汤及其有效组分生物碱、苷含药血浆可抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖(P<0.05)。②补阳还五汤及有效组分生物碱、苷含药血浆能抑制PDGF-BB诱导的VSMC由G0／G1期向G2／M期、S期转化(P<0.01)。③补阳还五汤及有效组分生物碱、苷含药血浆能下调PDGF-BB诱导的VSMC细胞周期相关蛋白PCNA、c-fos、CyclinD1和CDK4的表达(P<0.05),上调PDGF-BB诱导的VSMC细胞周期相关蛋白P21的表达(P＜0.05)。④补阳还五汤及有效组分生物碱、苷含药血浆可以下调PDGF-BB诱导的VSMC的MAPK信号转导途径相关蛋白P-ERK1/2及P-JNK1/2的表达(P<0.05)和上调MKP-1的表达(P<0.05)。结论：PPDGF-BB可诱导VSMC增殖。补阳还五汤及有效组分生物碱和苷含药血浆能抑制由PDGF-BB诱导的VSMC增殖,其作用是通过抑制MAPK信号转导途径的激活和上调MKP-1表达,调节相关周期蛋白的表达,从而抑制细胞周期由G0／G1期向G2／M期、S期的转变,发挥抗VSMC增殖作用,生物碱和苷类有效组分可能为该方抗VSMC增殖的药效物质之一。

全文目录


中英文索引  5-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-11
前言  11-13
第一部分 材料和方法  13-23
  1 材料  13-16
    1.1 主要仪器  13
    1.2 动物  13-14
    1.3 试剂  14-15
    1.4 药物  15-16
  2 方法  16-23
    2.1 大鼠主动脉平滑肌细胞培养和鉴定  16-17
    2.2 含药血浆的制备  17-18
    2.3 空白血浆细胞毒实验  18
    2.4 各含药血浆对PDGF诱导的VSMC增殖的半数抑制浓度(IC_(50))测定  18-19
    2.5 各含药血浆对PDGF诱导的VSMC细胞生长曲线的影响的测定  19
    2.6 各含药血浆对PDGF诱导的VSMC细胞周期及相关蛋白表达影响的测定  19-20
    2.7 各含药血浆对PDGF诱导的VSMC细胞MAPK信号转导通路相关蛋白表达测定  20-22
    2.8 统计学分析  22-23
第二部分 结果  23-35
  1 血浆细胞毒性实验结果  23
  2 各含药血浆对PDGF诱导的VSMC增殖的IC_(50)  23-25
  3 各含药血浆对PDGF诱导VSMC增殖的生长曲线的作用  25-27
  4 各含药血浆对PDGF诱导的VSMC增殖细胞周期的影响  27-29
  5 各含药血浆对PDGF诱导的VSMC细胞周期相关蛋白表达的影响  29-31
  6 各含药血浆对PDGF诱导的VSMC MAPK信号转导通路激活的影响  31-35
第三部分 讨论  35-56
  1 VSMC增殖在血管内膜增生中的地位和意义  35-36
  2 VSMC增殖调控及其机制  36-43
  3 中医药抗PTCA后再狭窄VSMC增殖作用的研究概况  43-49
  4 血浆药理学方法的选择  49-52
  5 补阳还五汤及其有效组分生物碱和苷对VSMC增殖的作用及其机制  52-53
  6 选择PNS和atorvastatin的说明  53-56
第四部分 结论  56-58
致谢  58-59
参考文献  59-68

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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