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油松花粉多糖的提取、纯化及抗氧化性研究

作　者: 周立波
导　师: 范三红
学　校: 山西大学
专　业: 食品科学
关键词: 油松花粉多糖提取纯化抗氧化性
分类号: TS255.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

进入21世纪后,花粉广泛应用于食品、药品和化妆品等领域。我国花粉事业仍然有些落后,要使我国花粉产业有所提高达到世界先进水平需靠科技创新,科研、生产、经营的协同努力。本论文以油松花粉为原料,对其中的花粉活性多糖的提取工艺进行研究,采用Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱层析对油松花粉多糖进行初步纯化;运用紫外扫描分析、红外光谱分析、气相色谱分析等方法对花粉多糖的结构进行了初步研究。并在系统研究了油松花粉多糖理化性质以及初级结构的基础上,通过体外模拟实验和碘量法研究油松花粉多糖对活性氧自由基的清除效果及对油脂氧化的影响。本文主要研究内容与结果如下:1.采用温差—机械法对油松花粉粉碎破壁,研究了油松花粉多糖的水提工艺,探讨提取温度、提取时间、料液比对多糖提取得率的影响。在单因素试验的基础上,通过正交试验确定最佳提取工艺条件。结果表明:提取时间3h,温度90℃,料液比1:25时为最佳提取工艺参数,油松花粉多糖的得率为1.4%。油松花粉多糖Molish试验、蒽酮-硫酸法试验、与间苯二酚反应结果均呈阳性,淀粉的碘试验呈阴性。2.Sephadex G-100柱层析对油松花粉精制多糖进行初步分离纯化,蒸馏水洗脱得到单一组分多糖。气相色谱分析结果表明纯化的油松花粉多糖为杂多糖,至少由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖及半乳糖六种单糖组成,各单糖组成摩尔比为:Rha:Ara:Xyl:Man:Glu:Gal=1:0.2:0.14:0.15:0.63:0.86。另外,GC图谱显示油松花粉多糖还含有一个未知的单糖,峰面积非常小,含量比较低。UV检测显示油松花粉多糖在260hm与280hm处未见有核酸和蛋白特征吸收峰,经IR检测证实油松花粉多糖具有多糖类物质的特征吸收峰。3.通过体外模拟实验,研究油松花粉多糖对活性氧自由基的清除效果。结果表明:精制油松花粉多糖清除DPPH自由基有一定的量效关系,但是这种量效效应表现的不明显;对羟基自由基的清除试验表现出较好的活性,呈现明显的量效关系,EC₅₀（清除50%自由基所需的样品浓度）=0.75mg/ml;对超氧阴离子自由基清除作用不显著,低浓度的油松花粉多糖几乎没有清除作用。对油脂具有较强抗氧化性,可以抑制猪油氧化。

全文目录

中文摘要  12-13
ABSTRACT  13-15
第一章引言  15-25
  1 松花粉研究概述  15-19
    1.1 松花粉资源分布概况  15-16
    1.2 松花粉的形态  16-17
    1.3 松花粉的营养成分  17-18
      1.3.1 蛋白质和氨基酸  17
      1.3.2 脂肪酸组成  17
      1.3.3 可溶性糖和多糖  17
      1.3.4 矿物质和微量元素  17-18
      1.3.5 维生素和黄酮类化合物  18
      1.3.6 核酸  18
    1.4 松花粉的生理功能  18-19
      1.4.1 延缓衰老  18
      1.4.2 抗疲劳  18-19
      1.4.3 调节免疫  19
      1.4.4 降血脂  19
      1.4.5 降血糖  19
      1.4.6 护肝  19
  2 多糖研究进展  19-22
    2.1 多糖的性质  20
    2.2 多糖的结构  20-21
    2.3 多糖中单糖组成分析  21-22
      2.3.1 纸色谱  21
      2.3.2 薄层色谱法  21
      2.3.3 高效液相色谱法  21-22
      2.3.4 衍生化用于糖蛋白或寡糖中单糖的HPLC分析  22
      2.3.5 气相色谱法  22
  3 花粉多糖的研究进展  22-24
    3.1 花粉多糖提取分离  22
    3.2 多糖纯化  22-23
    3.3 花粉多糖生物学活性  23-24
      3.3.1 抗肿瘤作用  23
      3.3.2 免疫作用  23
      3.3.3 抑菌  23
      3.3.4 抗辐射  23-24
  4. 本课题研究的意义及主要内容  24-25
第二章油松花粉多糖的提取工艺研究  25-32
  1 前言  25
  2 试验材料与仪器  25
    2.1 供试材料  25
    2.2 主要试剂及仪器  25
  3 实验方法  25-28
    3.1 破壁油松花粉样品的制备  26
    3.2 油松花粉多糖提取工艺流程  26
    3.3 油松花粉多糖提取条件的选择  26
    3.4 油松花粉多糖提取的正交实验  26
    3.5 油松花粉多糖的性质鉴定  26-27
      3.5.1 Molish试验(α-萘酚试验)  26-27
      3.5.2 蒽酮-硫酸法试验  27
      3.5.3 多糖与间苯二酚反应  27
      3.5.4 碘—碘化钾反应  27
    3.6 标准曲线的制作  27
    3.7 油松花粉多糖含量的测定  27-28
    3.8 数据分析  28
  4 结果与分析  28-31
    4.1 葡萄糖标准曲线  28
    4.2 提取温度对花粉多糖得率的影响  28-29
    4.3 提取时间对花粉多糖得率的影响  29
    4.4 料液比对花粉多糖得率的影响  29-30
    4.5 油松花粉多糖提取最优条件的选择  30-31
    4.6 油松花粉多糖的性质鉴定结果  31
  5 讨论  31-32
第三章油松花粉多糖的纯化与单糖组成分析  32-39
  1 前言  32
  2 实验材料与仪器  32-33
    2.1 供试材料  32
    2.2 主要试剂及仪器  32-33
  3 实验方法  33-34
    3.1 油松花粉纯多糖的制备  33
    3.2 油松花粉多糖的柱层析  33
      3.2.1 葡聚糖凝胶G-100预处理  33
      3.2.2 装柱与平衡  33
      3.2.3 上样  33
      3.2.4 洗脱及收集  33
    3.3 油松花粉多糖的紫外吸收光谱  33-34
    3.4 油松花粉多糖的红外光谱测定  34
    3.5 油松花粉多糖的单糖组成  34
      3.5.1 多糖水解  34
      3.5.2 单糖的糖腈乙酸酯衍生物的制备  34
      3.5.3 气相色谱分析条件  34
  4 结果与分析  34-38
    4.1 油松花粉多糖的柱层析  34-35
    4.2 紫外吸收光谱分析  35
    4.3 红外光谱测定  35-36
    4.4 油松花粉多糖的气相色谱分析结果  36-38
  5 讨论  38-39
第四章油松花粉多糖的抗氧化性  39-46
  1 前言  39
  2 实验材料与仪器  39-40
    2.1 供试材料  39
    2.2 主要试剂及仪器  39-40
  3 实验方法  40-42
    3.1 油松花粉多糖对DPPH自由基的清除作用  40
      3.1.1 DPPH溶液的配制  40
      3.1.2 DPPH自由基清除率的测定  40
    3.2 油松花粉多糖对羟基自由基(·OH)清除作用  40-41
    3.3 油松花粉多糖对超氧阴离子自由基(O_2~-·)清除作用  41
    3.4 对油脂的抗氧化作用  41-42
      3.4.1 猪油试样的处理  41
      3.4.2 过氧化值(POV)的测定  41-42
  4 结果与分析  42-44
    4.1 油松花粉多糖对DPPH自由基的清除作用  42
    4.2 油松花粉多糖对羟基自由基(·OH)清除作用  42-43
    4.3 油松花粉多糖对超氧阴离子自由基清除作用  43
    4.4 油松花粉多糖对猪油抗氧化性研究  43-44
  5 讨论  44-46
第五章结论  46-47
参考文献  47-52
发表论文  52
参与科研情况  52-53
致谢  53-54
个人简况  54-55

油松花粉多糖的提取、纯化及抗氧化性研究

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